本文選題：淫羊藿苷　切入點(diǎn)：炎癥　出處：《青島大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：阿爾茨海默癥(Alzheimer’s disease,AD)是發(fā)病率最高的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,主要表現(xiàn)為漸進(jìn)性記憶缺失和認(rèn)知障礙。研究顯示炎癥作為一個(gè)獨(dú)立的因素,在AD的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。作為傳統(tǒng)中藥淫羊藿中含量最豐富的成分,淫羊藿苷(icariin,ICA)在體內(nèi)、體外多種炎癥疾病模型均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用。ICA能夠通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞炎性因子的產(chǎn)生來發(fā)揮其抗炎及神經(jīng)保護(hù)作用,但其作用的靶點(diǎn)及相關(guān)的信號(hào)途徑,目前尚不清楚。已知ICA具有類雌激素活性,新近發(fā)現(xiàn)的膜表面雌激素受體G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)已被證實(shí)能夠介導(dǎo)大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元突觸的生長。GPER與配體結(jié)合后,通過G蛋白可激活生長因子受體、腺苷酸環(huán)化酶、磷脂酶C、鈣離子等信號(hào)途徑,發(fā)揮其生物學(xué)作用。本實(shí)驗(yàn)室研究證實(shí)ICA衍生物淫羊藿素可以通過胰島素樣生長因子-1受體(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)信號(hào)通路對(duì)抗神經(jīng)毒素MPP+對(duì)多巴胺能神經(jīng)元MES23.5細(xì)胞的損傷。ICA能夠通過MEK/ERK與PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)抗神經(jīng)毒素MPTP對(duì)小鼠多巴胺能神經(jīng)元的損傷。因此我們提出ICA能否通過GPER和IGF-1R信號(hào)通路來抑制海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活,減輕炎癥反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用ICR小鼠側(cè)腦室注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立AD炎癥模型,應(yīng)用水迷宮、real time PCR、western blot及免疫組化等多種技術(shù)方法檢測(cè)ICA抗AD炎癥的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.水迷宮結(jié)果顯示,與Control組相比,LPS模型組小鼠的潛伏期增加、目的象限時(shí)間比及平臺(tái)穿越次數(shù)減少(P0.01,P0.001);Real time PCR結(jié)果顯示,海馬區(qū)i NOS、COX-2、IL-1β及TNF-α基因表達(dá)均升高(P0.001);Western blot結(jié)果顯示,海馬炎性因子限速酶i NOS、COX-2的蛋白表達(dá)均升高(P0.001);淫羊藿苷不同劑量的ICA處理組(5mg/kg,10mg/kg,20mg/kg)均有不同程度的保護(hù)作用,其中10mg/kg為對(duì)抗LPS的最佳劑量,能夠明顯降低小鼠潛伏期、增加目的象限時(shí)間比及平臺(tái)穿越次數(shù)(P0.01,P0.001),降低炎性因子基因(P0.01,P0.001)和蛋白的表達(dá)(P0.05,P0.001)。2.GPER阻斷劑G15(0.2μg/1ml)能夠阻斷ICA對(duì)LPS誘導(dǎo)的AD炎癥模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善作用,相較于ICA組,其潛伏期明顯增加、目的象限時(shí)間比及平臺(tái)穿越次數(shù)明顯減少(P0.001);海馬區(qū)TNF-α、IL-1β、i NOS及COX-2基因表達(dá)均增加(P0.05,P0.01);海馬區(qū)炎性因子限速酶i NOS和COX-2蛋白表達(dá)也相應(yīng)增加(P0.01,P0.001);而G15+LPS組與LPS組相比,以上各指標(biāo)中均無明顯差異。3.LPS能夠提高M(jìn)APKs(ERK,JNK,p38)信號(hào)通路蛋白的磷酸化水平(P0.01,P0.001),ICA能夠?qū)筁PS引起的蛋白磷酸化(P0.05,,P0.01),此作用可以被G15所阻斷(P0.05,P0.01)。4.LPS能夠提高NF-κB信號(hào)通路IκB蛋白的磷酸化水平(P0.001),ICA能夠?qū)筁PS引起的蛋白磷酸化(P0.001),此作用亦可被G15所阻斷(P0.001)。5.IGF-1R阻斷劑JB-1(0.05μg/1?l)能夠部分阻斷ICA對(duì)LPS誘導(dǎo)的AD炎癥模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善作用;相較于ICA組,JB-1+ICA組潛伏期有顯著的減少、目的象限時(shí)間比增加(P0.05),但平臺(tái)穿越次數(shù)無明顯變化(P0.05);海馬區(qū)TNF-α和COX-2基因表達(dá)均增加(P0.05),而i NOS、IL-1β的表達(dá)雖有一定程度的增加,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);海馬區(qū)炎性因子限速酶i NOS和COX-2蛋白表達(dá)也相應(yīng)有一定程度的增加,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而JB-1+LPS組與LPS組相比,以上各指標(biāo)中均無明顯差異。6.免疫組化結(jié)果顯示LPS模型組小鼠海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目明顯增多;給予ICA后,海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目明顯減少;G15和JB-1均可阻斷其保護(hù)作用,且G15阻斷效果更明顯。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,ICA對(duì)LPS誘導(dǎo)的AD炎癥模型小鼠海馬區(qū)炎癥反應(yīng)具有抑制作用,其作用機(jī)制可能與GPER及IGF-1R信號(hào)通路的激活有關(guān)。本研究為AD的治療提供了新的靶點(diǎn)。
[Abstract]:The effect of ICA on dopaminergic neurons in the hippocampus of rats was studied by using the signal pathway of insulin - like growth factor - 1 receptor ( IGF - 1R ) . Compared with the group of ICA , the levels of protein phosphorylation ( P0.05 , P0.01 ) were significantly decreased in the hippocampus , and the level of protein phosphorylation ( P 0.01 , P0.001 ) was significantly decreased in the hippocampus . There was no significant difference in the expression of TNF - 偽 and COX - 2 in hippocampus , but there was no significant difference in the expression of TNF - 偽 and COX - 2 in hippocampus .

【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李林;張?zhí)m;;中藥治療阿爾茨海默病的作用特點(diǎn)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年08期

2 ;Progress in studies of huperzine A,a natural cholinesterase inhibitor from Chinese herbal medicine[J];Acta Pharmacologica Sinica;2006年01期

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本文編號(hào)：1687171