【摘要】：目的:在缺氧復(fù)氧條件下共培養(yǎng)單核細胞和人肺微血管內(nèi)皮細胞(HPMEC),探索單核細胞對HPMEC發(fā)生細胞焦亡的影響及相關(guān)機制。方法:Part Ⅰ:檢測單核細胞在缺氧復(fù)氧條件下分泌炎癥因子的種類、數(shù)量;選擇單核細胞經(jīng)NLRP3和TLR2炎性通路介導(dǎo)炎癥的表達情況,選取變化較大炎性通路為后續(xù)實驗干預(yù)對象。Part Ⅱ:設(shè)置共培養(yǎng)單核細胞和HPMEC以及單獨培養(yǎng)HPMEC,給與或不給與缺氧復(fù)氧干預(yù)四組實驗。實驗組為共培養(yǎng)單核細胞和HPMEC,予以缺氧復(fù)氧處理。各組實驗分別在開始處理后8h(復(fù)氧5h)和24h(復(fù)氧21h)后檢測各組HPMEC和其上清液中細胞焦亡指標caspase-1、IL-1β和IL-18表達情況。Part Ⅲ:根據(jù)Part Ⅰ實驗結(jié)果,選取經(jīng)NLRP3的目標炎性通路。設(shè)置敲低單核細胞NLRP3基因或抑制HPMEC細胞內(nèi)caspase-1活性后兩組細胞共培養(yǎng)實驗,并分別建立對照組,予以缺氧3h后復(fù)氧1h處理。隨后同Part Ⅱ檢測各時間點HPMEC焦亡指標。結(jié)果:單核細胞和HPMEC共培養(yǎng),在缺氧復(fù)氧后,HPMEC活性明顯降低、釋放更多LDH和分泌及表達IL-1β、IL-18、caspase-1明顯增加,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。并且與復(fù)氧后時間呈輕度正相關(guān)。敲減單核細胞中NLRP3基因或抑制HPMEC細胞內(nèi)caspase-1后共培養(yǎng),在缺氧復(fù)氧后,HPMEC活性明顯增加、釋放LDH減少;分泌和表達IL-1β、IL-18、caspase-1明顯減少,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:在缺氧復(fù)氧條件下,單核細胞能夠增加HPMEC發(fā)生細胞焦亡的程度。其發(fā)生機制可能與單核細胞分泌的炎性因子,如IL-1β、IL-18作用于HPMEC和(或)單核細胞自身細胞焦亡,促進HPMEC發(fā)生細胞焦亡有相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R655.3
【圖文】：

圖 1 各組細胞中 NLRP3、TLR2 的蛋白表達圖U937 為 U937 細胞不做處理組；U937+H/R-8h 為 U937 細胞缺氧 3h 復(fù)氧 1h，開始處理因素 8h（復(fù)氧 5h 后）后；U937+H/R-24h 為 U937 細胞缺氧 3h 復(fù)氧 1h，開始處理因素 24h（復(fù)氧 24h 后）后。THP-1 為 THP-1 細胞不做處理組；THP-1+H/R-8h為THP-1細胞缺氧3h復(fù)氧1h，開始處理因素8（h復(fù)氧5h后）后；THP-1+H/R-24h為 THP-1 細胞缺氧 3h 復(fù)氧 1h，開始處理因素 24h（復(fù)氧 24h 后）后。表 1 各組細胞中 NLRP3、TLR2 的蛋白灰度分析2、Elisa 試劑分別檢測 THP-1 和 U937 細胞上清 IL-1β、IL-18、IL-6、IL-8、TNF-α 的表達

THP-1、U937細胞上清的IL-1β、IL-18濃度

THP-1、U937細胞上清的IL-6、IL-8及TNF-α濃度

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本文編號：2759287