發(fā)布時間：2017-03-21 04:11

  本文關鍵詞：含氫培養(yǎng)液對脂多糖致Raw264.7巨噬細胞炎癥反應的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 膿毒癥(sepsis)是感染因素誘發(fā)的全身炎癥反應綜合癥(systemic inflammatory response syndrome, SIRS),是燒傷、創(chuàng)傷和大手術等的常見并發(fā)癥,是危重癥患者死亡首要因素。革蘭陰性菌是誘發(fā)膿毒癥的主要病原體,而脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革蘭陰性菌致病的主要成分,可激活體內(nèi)免疫細胞(如巨噬細胞),發(fā)揮一系列病理生理反應。單核／巨噬細胞是機體對抗外界有害刺激的識別細胞,是抵御外界反應的第一道防線,通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)外活性和釋放炎癥介質,在機體對損傷或感染的炎癥反應過程中發(fā)揮著舉足輕重的作用。氫氣是自然界中最小的分子,是最簡單、最富有的元素,又是無色、無嗅、無味、具有一定還原性的雙原子氣體。近年來發(fā)現(xiàn)其具有抗氧化、抗炎癥、抗凋亡等作用,對多種疾病具有治療意義。利用膿毒癥動物模型,我們發(fā)現(xiàn)氫氣具有明顯的抗炎作用,但具體機制不清。本實驗擬探討含氫培養(yǎng)液對LPS刺激Raw264.7巨噬細胞增殖活力和凋亡、炎癥因子釋放的影響以及相關機制。 方法： 小鼠巨噬細胞系Raw264.7,培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基,接種于6孔或96孔細胞培養(yǎng)板,3mL/孔或200μL/孔,細胞密度2×106/mL。 第一部分：含氫培養(yǎng)液對LPS所致Raw264.7細胞增殖活力和凋亡的影響。實驗分組如下：Con組、Con+H2組、LPS組和LPS+H2組。Raw264.7細胞培養(yǎng)24h后,換成正常培養(yǎng)液或不同濃度的含氫培養(yǎng)液培養(yǎng),同時給予LPS(1μg/mL)或等量PBS (LPS溶劑)處理24h,應用MTT法和Annexin V/PI法檢測細胞增殖活力和凋亡情況。 第二部分：含氫培養(yǎng)液對LPS所致Raw264.7細胞炎癥反應的影響。實驗分組和處理同第一部分,用LPS和含氫培養(yǎng)液處理24h后,收集細胞培養(yǎng)液,檢測炎癥因子TNF-α、IL-1β、HMGB1和IL-10;此外,應用飽和含氫培養(yǎng)液(0.60mmol/L)培養(yǎng)細胞,于LPS處理后0h、3h、6h、12h、24h收集細胞培養(yǎng)液,檢測炎癥因子TNF-α、IL-1β、HMGB1和IL-10。 第三部分：HO-1在含氫培養(yǎng)液調(diào)控LPS致Raw264.7炎癥反應中的作用。實驗分為四組：Con組、Con+H2組、LPS組和LPS+H2組。氫氣處理組用飽和含氫培養(yǎng)液(0.60mmol/L)培養(yǎng),分別于LPS處理后Oh、3h、6h、12h和24h收集細胞,測定HO-1活性和HO-1表達水平。進一步利用HO-1特異性拮抗劑ZnPP-Ⅸ (20μmol/L),通過檢測炎癥因子TNF-α、IL-1β、HMGB1和IL-10的水平,觀察HO-1在含氫培養(yǎng)液調(diào)控炎癥反應中的作用。 結果： 第一部分：氫氣對巨噬細胞無明顯毒性影響(P0.05)。含氫培養(yǎng)液對細胞活力無明顯影響(P0.05),但可以改善LPS導致的巨噬細胞活力情況,呈劑量依賴性(P0.05)。LPS導致大量細胞凋亡,給予含氫培養(yǎng)液培養(yǎng),細胞凋亡明顯減少(P0.05)。 第二部分：LPS培養(yǎng)細胞導致炎癥因子釋放增加(P0.05),促炎因子TNF-α和IL-1p在6h時到達釋放高峰,而抗炎因子IL-10和晚期促炎因子HMGB1在24h達到釋放高峰,給予不同濃度的含氫培養(yǎng)液處理均可以降低促炎炎癥因子的釋放、增加抗炎炎癥因子的釋放,0.30和0.60mmol/L的含氫培養(yǎng)液治療作用明顯,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 第三部分：與細胞正常情況下HO-1的活性和表達相比,LPS可以誘發(fā)巨噬細胞HO-1的活性和表達(P0.05)。飽和含氫培養(yǎng)液可以提高LPS處理的巨噬細胞HO-1的活性和表達(P0.05),且具有時間依賴性。利用Znpp抑制HO-1的活性發(fā)現(xiàn),Znpp逆轉了含氫培養(yǎng)液對巨噬細胞炎癥因子的治療作用(P0.05),說明Znpp抑制HO-1的活性,進一步抑制含氫培養(yǎng)液對過度炎癥反應的調(diào)節(jié)作用。 結論： 含氫培養(yǎng)液可以減輕LPS導致的巨噬細胞活力下降,可以減少LPS誘導的巨噬細胞凋亡；含氫培養(yǎng)液可以減輕LPS誘發(fā)的巨噬細胞過度炎癥反應,減少促炎細胞因子的釋放,增加抗炎因子的表達,且具有濃度依賴性；HO-1在含氫培養(yǎng)液調(diào)控炎癥反應中起重要作用。
【關鍵詞】：含氫培養(yǎng)液 LPS 巨噬細胞 炎癥反應 HO-1
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 縮略語/符號說明12-14
• 前言14-17
• 研究現(xiàn)狀、成果14-16
• 研究目的、方法16-17
• 第一部分 含氫培養(yǎng)液對LPS誘發(fā)Raw264.7巨噬細胞增殖和凋亡的影響17-24
• 1.1 材料和方法17-21
• 1.1.1 實驗材料17-18
• 1.1.2 實驗方法18-21
• 1.2 結果21-24
• 1.2.1 含氫培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞不同時間的濃度21
• 1.2.2 不同濃度含氫培養(yǎng)液對巨噬細胞毒性的影響21-22
• 1.2.3 含氫培養(yǎng)液對巨噬細胞凋亡的影響22-24
• 第二部分 含氫培養(yǎng)液對LPS誘發(fā)Raw264.7巨噬細胞炎癥因子釋放的影響24-31
• 2.1 材料和方法24-27
• 2.1.1 實驗材料24-25
• 2.1.2 實驗方法25-27
• 2.2 結果27-31
• 2.2.1 不同時間點飽和含氫培養(yǎng)液對LPS致巨噬細胞炎癥因子釋放的影響27-28
• 2.2.2 不同濃度含氫培養(yǎng)液對LPS致巨噬細胞釋放炎癥因子的影響28-31
• 第三部分 含氫培養(yǎng)液通過HO-1發(fā)揮對LPS誘發(fā)Raw264.7巨噬細胞炎癥反應的保護作用31-40
• 3.1 材料和方法31-36
• 3.1.1 實驗材料31-32
• 3.1.2 實驗方法32-36
• 3.2 結果36-40
• 3.2.1 飽和含氫培養(yǎng)液對LPS致巨噬細胞HO-1的影響36-38
• 3.2.2 HO-1在飽和含氫培養(yǎng)液對LPS致巨噬細胞炎癥反應中的作用38-40
• 第四部分 討論40-43
• 結論43-44
• 創(chuàng)新點44-45
• 參考文獻45-49
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明49-51
• 綜述 氫氣對肺損傷的保護效應及其機制研究進展51-63
• 綜述參考文獻58-63
• 致謝63-65
• 附件65-69

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：含氫培養(yǎng)液對脂多糖致Raw264.7巨噬細胞炎癥反應的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：259021