【摘要】：大面積深度燒、創(chuàng)傷會(huì)造成皮膚的正常結(jié)構(gòu)和功能嚴(yán)重受損，其中皮膚附屬器如汗腺等結(jié)構(gòu)的破壞及功能喪失將嚴(yán)重影響燒、創(chuàng)傷患者的生存質(zhì)量。目前已有研究證明間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)能有效參與促進(jìn)皮膚與汗腺損傷的修復(fù)與再生，有望促進(jìn)燒、創(chuàng)傷后患者的修復(fù)效果并改善其生存質(zhì)量。MSCs是一類具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞，目前在研究和臨床上的應(yīng)用也越來(lái)越廣泛。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，骨髓來(lái)源的MSC（sBone marrow derived-MSCs，BMMSCs)在特定的誘導(dǎo)環(huán)境下能夠成功地向汗腺樣細(xì)胞分化并修復(fù)受損的汗腺組織。然而，受到細(xì)胞培養(yǎng)周期的限制，無(wú)法在燒、創(chuàng)傷治療的早期得以應(yīng)用，同時(shí)BMMSCs的獲取須行骨髓穿刺術(shù)，給供者造成一定痛苦，且BMMSCs的增殖及分化潛能隨供者年齡的增大而下降。因此，尋找新的MSCs來(lái)源是目前國(guó)內(nèi)外干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)。 臍帶作為MSCs的一種可靠來(lái)源，較骨髓容易獲得，具有操作簡(jiǎn)便，來(lái)源豐富，分化能力強(qiáng)，對(duì)供者無(wú)傷害，移植物抗宿主病（GVHD）發(fā)生率低，干細(xì)胞所占比例大以及避免倫理爭(zhēng)議等諸多優(yōu)點(diǎn)，更有望應(yīng)用于臨床治療。目前其多向分化潛能已得到證實(shí)，因此臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(umbilical cord derived-MSCs，UCMSCs)可以作為一種嶄新的細(xì)胞治療策略應(yīng)用于燒傷后汗腺損傷修復(fù)再生研究。我們?cè)谇捌谘芯恐幸殉醪桨l(fā)現(xiàn)UCMSCs在特定的誘導(dǎo)環(huán)境下具有向汗腺樣細(xì)胞分化的潛能。然而，因培養(yǎng)條件以及血清使用、添加細(xì)胞因子種類等不同，造成不同批次的細(xì)胞表型、增殖能力、長(zhǎng)期培養(yǎng)后的細(xì)胞功能以及向汗腺細(xì)胞的分化能力等存在較大差異，直接影響了UCMSCs在汗腺再生研究中的應(yīng)用。因此亟待建立一種符合臨床使用的非動(dòng)物源性培養(yǎng)條件下UCMSCs分離、培養(yǎng)和鑒定方法以及向汗腺細(xì)胞分化的標(biāo)準(zhǔn)化體系，為開(kāi)展進(jìn)一步的基礎(chǔ)研究和深入的臨床前實(shí)驗(yàn)研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 本研究分為以下兩部分：1.首先，建立非動(dòng)物源性培養(yǎng)條件下UCMSCs分離、培養(yǎng)與鑒定體系，，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的表面抗原的表達(dá)、分析細(xì)胞的增殖活性。2.建立非動(dòng)物源性培養(yǎng)條件下UCMSCs向汗腺細(xì)胞分化體系，采用流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR、western-blot以及染色體核型分析等鑒定分化后汗腺樣細(xì)胞的標(biāo)志物以及臨床前應(yīng)用的安全性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，UCMSCs在無(wú)動(dòng)物血清的安全培養(yǎng)條件下依然能保持MSCs特有的生物學(xué)表型和增殖能力，且各組間無(wú)明顯差異；經(jīng)無(wú)動(dòng)物血清汗腺分化培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下，UCMSCs可以成功地向汗腺樣細(xì)胞分化，誘導(dǎo)后細(xì)胞的汗腺標(biāo)記物CEA，CK14，CK19以及汗腺發(fā)育基因EDA以及EDAR均為陽(yáng)性表達(dá)，且分化能力與本組之前的汗腺誘導(dǎo)方法（添加動(dòng)物血清）無(wú)顯著差異，誘導(dǎo)后細(xì)胞經(jīng)長(zhǎng)期培養(yǎng)后檢測(cè)染色體無(wú)畸變。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果為建立標(biāo)準(zhǔn)化的UCMSCs培養(yǎng)鑒定體系以及UCMSCs用于修復(fù)汗腺損傷的臨床治療和誘導(dǎo)后汗腺庫(kù)的建立提供了可靠的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R644

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 盛志勇;付小兵;蔡颯;雷永紅;孫同柱;白曉東;陳敏亮;;汗腺的種植(附2例報(bào)告)[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2008年04期

2 付小兵,孫曉慶,孫同柱,李建福,程飚,陳偉,盛志勇;瘢痕組織中汗腺的分布特征以及瘢痕對(duì)汗腺再生影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華創(chuàng)傷雜志;2001年06期

本文編號(hào)：2388201