本文關鍵詞：腸源性膿毒癥腹腔滲液致急性肺損傷的機理研究

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【摘要】：目的:通過觀察腸源性膿毒癥腹腔滲液門、腔靜脈注射所致肺損傷情況,探索腸源性膿毒癥腹腔滲液導致急性肺損傷的機理。方法:采用清潔級健康成年SD大鼠108只,隨機提取12只作為模型組(腹腔滲液組),采用盲腸結扎并穿孔法(CLP),制備腸源性膿毒癥腹腔滲液(EFIS)模型,采集腹腔滲液,以精密過濾輸液器(過濾介質(zhì)孔徑5μm)過濾去除直徑大于5μm的顆粒狀物,濾出液備用;其余96只大鼠隨機分為滲液組(E組,n=48)和對照組(S組,n=48);每組再隨機分為門靜脈亞組(PV組、n=24)、腔靜脈亞組(VC組、n=24),各亞組按1h,2h,4h,6h時間點再分為4個次亞組,每個次亞組6只大鼠,共16個次亞組。E組分別經(jīng)門、腔靜脈注射處理后的腹腔滲液(1ml/只),S組注射等量的無菌生理鹽水;各組大鼠分別于注射后第1h,2h,4h,6h時間點經(jīng)腹主動脈采血、處死后取材肺標本、收集肺泡灌洗液(BALF);觀察肺的形態(tài)學改變;測定肺濕/干比值(W/D);肺組織經(jīng)固定、切片、染色處理后,光鏡下閱片、病理學評分;酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)測定腹腔滲液、血清及BALF中TNF-α及IL-6含量。MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)測定腹腔滲液、血清及BALF中LPS含量;所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0 for Windows統(tǒng)計軟件進行處理,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義,P0.01為具有顯著差異。結果:1)每只大鼠可采集5-10ml腹腔滲液,其性狀為淡黃色或淡粉色略混濁樣液體。細菌涂片鏡檢見革蘭氏陰性桿菌,細菌培養(yǎng)分離出8株細菌,其中大腸桿菌菌落數(shù)最多;腹腔滲液中亦檢測出一定水平的LPS、TNF-α及IL-6。2)兩組對照組(PV-S、VC-S組)各觀察時間點的肺形態(tài)學及光鏡所見、病理學評分、肺濕/干重比值(W/D)、血清及BALF中LPS、TNF-α及IL-6水平均無明顯差異,均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。滲液組(PV-E、VC-E組)與對照組(PV-S、VC-S組)相比較:各觀察時間點肺形態(tài)學及光鏡所見差異顯著,肺組織病理學評分、肺濕/干重比值(W/D)、血清及BALF中LPS、TNF-α及IL-6測定值均較對照組(PV-S、VC-S組)明顯增高,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(aP0.01,bP0.01)。3)肺臟大體形態(tài)學及光鏡所見:門靜脈組(PV-E)各時間點肺臟大體觀:肺的水腫、出血程度均較腔靜脈組(VC-E)明顯;鏡下所見:肺泡壁、肺間質(zhì)水腫程度,肺泡腔中性粒細胞及單核細胞浸潤程度,肺泡間質(zhì)、肺泡腔充血出血程度均較腔靜脈組(VC-E)明顯;4)病理學評分:PV-E組各時間點肺組織病理學評分均較VC-E組高,PV-E組1h即出現(xiàn)明顯肺損傷,出現(xiàn)時間較VC-E組早,且隨時間呈遞進式加重,PV-E組與VC-E組病理學評分相比較,差異具有統(tǒng)計學意義(aP0.05)。5)肺濕/干重比值(W/D)測定:PV-E組與VC-E組各觀察時間點的肺濕/干重比值(W/D)相比較,差異均具有統(tǒng)計學意義(a P0.05);6)血清及BALF中LPS水平:PV-E組與VC-E組各時間點LPS水平均呈逐漸下降趨勢,但PV-E組下降更明顯;與VC-E組相比較,1h、2h、4h時間點LPS水平差異明顯,均具有統(tǒng)計學意義(b P0.05),兩組間6h時間點LPS水平無明顯差異(P0.05)。7)血清及BALF中TNF-α及IL-6水平:PV-E組與VC-E組血清及BALF中TNF-α及IL-6水平的測定水平在各觀察時間點均逐漸增高,TNF-α水平4h達峰值,達峰值后6h有下降趨勢;IL-6水平6h達最高值。PV-E組與VC-E組相比較,各時間點TNF-α及IL-6水平差異均具有統(tǒng)計學意義(aP0.05)。結論:⑴.利用CLP方法可成功制備腸源性膿毒癥模型,腹腔滲液經(jīng)門靜脈及腔靜脈注射均可造成大鼠急性肺損傷;⑵.腸源性膿毒癥腹腔滲液中存在大腸桿菌為主的多種致病菌、LPS、TNF-α及IL-6等主要成分;⑶.門靜脈組血清及肺泡灌洗液中LPS水平低于腔靜脈組,TNF-α及IL-6水平明顯高于腔靜脈組,而肺損傷程度比腔靜脈組明顯嚴重,LPS水平及TNF-α、IL-6水平與肺損傷嚴重程度具有一定的相關性,提示LPS是炎癥介質(zhì)的啟動因素,而TNF-α及IL-6是腸源性膿毒癥導致急性肺損傷的主要因素;腹腔滲液經(jīng)肝臟作用與否,肺損傷的程度不同,提示肝臟在腸源性膿毒癥肺損傷的發(fā)生發(fā)展中可能起某種關鍵作用。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R459.7

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本文編號：1210676