目的探討降低大鼠腸道組織自發(fā)熒光的簡(jiǎn)便可行方法。方法取正常SD大鼠(n=5)腸道做冷凍切片,熒光顯微鏡下觀察自發(fā)熒光(AF),檢測(cè)蘇丹黑B(SBB)對(duì)AF的影響及其在腸道免疫熒光(IF)染色中的應(yīng)用。結(jié)果大鼠各腸段組織在FITC和TRITC通道存在大量明顯的AF,且不受血清封閉的影響;應(yīng)用0. 3%SBB處理組織10 min,可顯著降低AF; IF染色加SBB處理后的腸道可見AF顯著降低,目的蛋白的熒光表達(dá)不受影響。結(jié)論0. 3%SBB染色10 min能顯著降低大鼠腸道組織的AF,使IF特異性染色更加鮮明。

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【部分圖文】：

圖1 空腸、回腸和結(jié)腸內(nèi)存在大量AF

光學(xué)顯微鏡下SBB染色形成的黑色點(diǎn)狀著色產(chǎn)物是判斷AF下降程度的參考指標(biāo)，數(shù)量越多，AF的降低越顯著[12]。我們應(yīng)用不同濃度的SBB染液對(duì)組織進(jìn)行染色，結(jié)果顯示，除黏膜上皮層外，其余各層均存在明顯的點(diǎn)狀著色(圖3A2～3A4,3B2～3B4)。與0.1%SBB染色比較，使用0.....

圖3 0.3%SBB染色10 min時(shí)染色效果最佳標(biāo)尺示50μm

圖2血清封閉不能降低回腸內(nèi)AF圖4SBB處理顯著降低大鼠空腸、回腸和結(jié)腸中的AF

圖5 SBB處理顯著提高大鼠腸道CD45 IF染色的特異性免疫熒光

圖4SBB處理顯著降低大鼠空腸、回腸和結(jié)腸中的AFSBB是一種穩(wěn)定無毒的脂溶性染料，可通過與脂褐素等脂質(zhì)結(jié)合從而吸收由其產(chǎn)生的AF，從而發(fā)揮其熒光遮蓋作用[6]。但SBB能否應(yīng)用于降低大鼠腸道AF，以及SBB的應(yīng)用濃度與時(shí)間，目前尚鮮見報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)，0.3%SBB處理組織1....

圖2 血清封閉不能降低回腸內(nèi)AF

圖1空腸、回腸和結(jié)腸內(nèi)存在大量AF圖30.3%SBB染色10min時(shí)染色效果最佳標(biāo)尺示50μm

本文編號(hào)：4034752