人角膜內皮(Human Corneal Endothelium, HCE)由單層扁平的六角形HCE細胞構成,是角膜和房水之間的重要屏障,其細胞密度及單層的完整性是維持角膜的正常厚度、透明度及視敏度的關鍵。成年后,已形成匯合單層的HCE細胞不僅喪失了增殖能力,而且還以每年0.3%-0.6%的速率死亡,局部細胞死亡后只能依賴臨近細胞的擴大和移行來修復單層的完整性。一旦受到外界創(chuàng)傷、感染及藥物毒害后,HCE細胞的死亡速率便會加快,將造成HCE細胞密度的迅速下降,輕者會引起角膜輕度水腫、透明度降低、視敏度下降,重者將導致HCE失代償,最終引起角膜內皮盲(少于400～500細胞/mm2),使人失明。現有研究結果顯示,成年后已喪失增殖能力的HCE細胞雖然被拘留在細胞周期的G1期,但仍保留有激活后恢復增殖的潛能。許多研究證實,接觸抑制和TGF-β2是體內抑制HCE細胞增殖的主要原因,解除其接觸抑制狀態(tài)和加入TGF-β2印制劑能夠刺激HCE細胞重新恢復增殖能力,但其具體作用效果和分子機理仍有待于進一步研究。除眼睛內部的影響因素以外,太陽光中的紫外線(UV)也會對HCE細胞造成一定的氧化損傷作用,很可能也...

【文章頁數】：122 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 人角膜內皮和人角膜內皮細胞
        1.1 人角膜內皮的結構與功能
        1.2 人角膜內皮細胞獨有的形態(tài)特征
    2 人角膜內皮細胞的增殖能力及其影響因素
        2.1 人角膜內皮細胞的增殖能力
            2.1.1 細胞周期
            2.1.2 人角膜內皮細胞的增殖特性
                2.1.2.1 增殖能力的年齡相關性
                2.1.2.2 增殖能力的區(qū)域相關性
        2.2 接觸抑制對人角膜內皮細胞增殖能力的抑制作用
        2.3 TGF-β2對人角膜內皮細胞增殖能力的抑制作用
            2.3.1 TGF-β的信號傳導通路
            2.3.2 TGF-β2對人角膜內皮細胞的影響作用
        2.4 生長因子對人角膜內皮細胞增殖能力的影響
        2.5 DNA氧化損傷對人角膜內皮細胞增殖能力的影響
    3 刺激人角膜內皮細胞增殖的研究進展
        3.1 解除接觸抑制對人角膜內皮細胞增殖的激活研究
        3.2 持續(xù)的生長因子刺激對人角膜內皮細胞增殖的激活研究
        3.3 解除G1期抑制對人角膜內皮細胞增殖的激活研究
        3.4 其他因素對人角膜內皮細胞增殖的激活研究
            3.4.1 細胞外基質
            3.4.2 ROCK抑制劑
    4 人角膜內皮細胞的光損傷及其抗氧化保護劑
    5 本研究的目的和意義
第二章 解除細胞接觸抑制對人角膜內皮細胞體外增殖能力的影響作用研究
    1 實驗材料與用品
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗藥品及試劑
        1.4 幾種主要溶液的配方
    2 實驗方法
        2.1 細胞接觸抑制對人角膜內皮細胞增殖的影響作用研究
            2.1.1 人角膜內皮細胞的體外培養(yǎng)及其接觸抑制模型的建立
            2.1.2 人角膜內皮細胞增殖能力的EdU滲入檢測
        2.2 EDTA解除接觸抑制對HCE細胞的影響作用研究
            2.2.1 EDTA處理人角膜內皮細胞形態(tài)影響作用的光鏡檢測
            2.2.2 EDTA處理人角膜內皮細胞增殖能力的EdU滲入檢測
            2.2.3 EDTA處理人角膜內皮細胞中骨架蛋白表達的免疫熒光檢測
            2.3.4 EDTA處理人角膜內皮細胞中功能蛋白表達的免疫熒光檢測
        2.3 Y-27632對EDTA處理人角膜內皮細胞的影響作用研究
            2.3.1 Y-27632處理人角膜內皮細胞的貼壁能力的光鏡檢測
            2.3.2 Y-27632處理人角膜內皮細胞的生長曲線測定
            2.3.3 Y-27632對EDTA處理人角膜內皮細胞形態(tài)影響作用的光鏡檢測
            2.3.4 Y-27632對EDTA處理人角膜內皮細胞增殖活性影響作用的EdU滲入檢測
            2.3.5 Y-27632對EDTA處理人角膜內皮細胞骨架蛋白表達影響作用的免疫熒光檢測
            2.3.6 Y-27632對EDTA處理人角膜內皮細胞功能蛋白表達影響作用的免疫熒光檢測
        2.4 接觸抑制人角膜內皮細胞中ROCK1及CKI的Western blot檢測
    3 實驗結果
        3.1 接觸抑制對人角膜內皮細胞增殖的影響作用
        3.2 EDTA對接觸抑制的人角膜內皮細胞的影響作用
            3.2.1 EDTA對人角膜內皮細胞形態(tài)及生長的影響
            3.2.2 EDTA對人角膜內皮細胞骨架的影響
            3.2.3 EDTA對人角膜內皮細胞增殖能力的影響
        3.3 Y-27632對EDTA處理人角膜內皮細胞的影響作用
            3.3.1 Y-27632對人角膜內皮細胞貼壁能力的影響
            3.3.2 Y-27632對人角膜內皮細胞生長曲線的影響
            3.3.3 Y-27632對EDTA處理的人角膜內皮細胞形態(tài)的影響
            3.3.4 Y-27632對EDTA處理的人角膜內皮細胞增殖能力的影響
            3.3.5 Y-27632對EDTA處理的人角膜內皮細胞骨架的影響
            3.3.6 Y-27632對EDTA處理的人角膜內皮細胞功能蛋白表達的影響
        3.4 Y-27632及EDTA對人角膜內皮細胞中ROCK1和CKI表達的影響作用
    4 討論
    5 結論
第三章 TGF-B2對人角膜內皮細胞體外增殖能力的影響作用及其分子機理研究
    1 實驗材料與用品
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗藥品及試劑
        1.4 幾種主要溶液的配方
    2 實驗方法
        2.1 TGF-β2對人角膜內皮細胞增殖的影響作用研究
            2.1.1 TGF-β2處理人角膜內皮細胞活力的MTT法檢測
            2.1.2 TGF-β2處理人角膜內皮細胞增殖能力的EdU滲入檢測
        2.2 TGF-β2調控HCE細胞增殖的信號通路研究
            2.2.1 TGF-β2抑制劑處理人角膜內皮細胞增殖能力的EdU滲入檢測
            2.2.2 TGF-β2抑制劑處理人角膜內皮細胞的Smad信號通路蛋白及CKI表達的Westernblot檢測
    3 實驗結果
        3.1 TGF-β2對人角膜內皮細胞增殖活性的影響作用
        3.2 Smad信號通路在TGF-β2調控人角膜內細胞增殖中的作用
            3.2.1 TGF-β2及其信號通路抑制劑對人角膜內皮細胞增殖能力的影響作用
            3.2.2 TGF-β2和SB431542對Smad信號通路蛋白及CKI表達的影響作用
    4 討論
    5 結論
第四章 人角膜內皮細胞氧化損傷的保護
    1 實驗材料與用品
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗藥品及試劑
        1.4 幾種主要溶液的配方
    2 實驗方法
        2.1 建立人角膜內皮細胞的UVB誘導損傷模型
            2.1.1 人角膜內皮細胞形態(tài)及生長狀態(tài)的光鏡檢測
            2.1.2 人角膜內皮細胞活力的MTT檢測
        2.2 UVB照射誘導人角膜內皮細胞損傷的機理研究
            2.2.1 人角膜內皮細胞中ROS水平的DHE染色檢測
            2.2.2 人角膜內皮細胞中DNA氧化損傷的8-OHdG免疫熒光染色檢測
            2.2.3 人角膜內皮細胞中p53、p-p53及p21^Cipl表達的Western blot檢測
        2.3 抗氧化劑對人角膜內皮細胞氧化損傷的保護作用研究
            2.3.1 人角膜內皮細胞活力的MTT檢測
            2.3.2 人角膜內皮細胞形態(tài)及生長狀態(tài)的光鏡檢測
            2.3.3 人角膜內皮細胞中DNA氧化損傷的8-OHdG免疫熒光染色檢測
            2.3.4 人角膜內皮細胞中ROS水平的DHE染色檢測
            2.3.5 人角膜內皮細胞中p53、p-p53及p21^Cipl表達的Western blot檢測
    3 實驗結果
        3.1 UVB照射對人角膜內皮細胞的影響作用
            3.1.1 UVB照射對人角膜內皮細胞活力的影響作用
            3.1.2 UVB照射對人角膜內皮細胞形態(tài)及生長的影響
            3.1.3 UVB照射人角膜內皮細胞的形態(tài)及生長的恢復
        3.2 UVB誘導人角膜內皮細胞氧化損傷的分子機理
            3.2.1 UVB照射對人角膜內皮細胞中ROS水平的影響作用
            3.2.2 UVB照射人角膜內皮細胞在恢復過程中ROS水平的變化
            3.2.3 UVB照射人角膜內皮細胞在恢復過程中DNA氧化損傷的變化
            3.2.4 UVB照射人角膜內皮細胞中p53、p-p53及p21^Cipl表達的影響作用
        3.3 抗氧化劑對UVB誘導的人角膜內皮細胞氧化損傷的保護作用
            3.3.1 四種抗氧化劑對人角膜內皮細胞活力的影響作用
            3.3.2 Asc-2P對UVB照射人角膜內皮細胞形態(tài)及生長的影響作用
            3.3.3 Asc-2P對UVB照射的人角膜內皮細胞DNA氧化損傷的影響作用
            3.3.4 Asc-2P對UVB照射的人角膜內皮細胞中ROS水平的影響作用
            3.3.5 Asc-2P對UVB照射的人角膜內皮細胞中p53、p-p53及p21^Cipl表達的影響作用
    4 討論
    5 結論
全文總結
參考文獻
致謝
個人簡歷
在學期間發(fā)表的學術論文



本文編號：4015973