目的克隆鮑曼不動桿菌二硫鍵形成蛋白C(DsbC)基因,制備重組DsbC蛋白,為研究其活性奠定基礎(chǔ)。方法通過NCBI獲得DsbC蛋白序列,分析其生物學(xué)性質(zhì)。采用PCR方法擴(kuò)增無信號肽DsbC基因,并將其連接到表達(dá)質(zhì)粒pET28a,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-DsbC,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3)后用IPTG誘導(dǎo)DsbC蛋白的表達(dá),采用鎳離子親和層析法純化目的蛋白。結(jié)果 DsbC具有一個信號肽,由2個相同的DsbC蛋白分子構(gòu)成二聚體。PCR擴(kuò)增去掉信號肽的DsbC基因大小為636bp,構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET28a-DsbC經(jīng)PCR測序驗(yàn)證正確。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DE3后經(jīng)IPTG誘導(dǎo),表達(dá)分子質(zhì)量單位為26.1×10³的DsbC蛋白,經(jīng)鎳柱純化得到單一電泳條帶的重組蛋白。結(jié)論使用基因工程的方法表達(dá)并經(jīng)鎳柱層析得到高純度的鮑曼不動桿菌DsbC蛋白,為進(jìn)一步研究其活性奠定了基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 鮑曼不動桿菌DsbC蛋白的生物信息學(xué)分析
        2.2 DsbC基因的PCR擴(kuò)增
        2.3 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.4 重組DsbC蛋白的表達(dá)與純化
結(jié)果
    1 DsbC蛋白的生物信息學(xué)分析
    2重組質(zhì)粒pET28a-DsbC的構(gòu)建及鑒定
    3 重組DsbC蛋白在大腸埃希菌中的表達(dá)與純化
討論



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