目的建立嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(SARS-CoV-2)假病毒(SARS-CoV-2 pps)的制備方法。方法設(shè)計(jì)、合成序列優(yōu)化的SARS-CoV-2刺突蛋白(S)基因,構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,用免疫熒光檢測(cè)S蛋白的表達(dá);將該質(zhì)粒與基于慢病毒基因骨架的含增強(qiáng)綠色熒光蛋白(EGFP)報(bào)告基因的假病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清,感染Vero E6和Huh7細(xì)胞,觀察細(xì)胞內(nèi)EGFP的表達(dá);將制備的SARS-CoV-2 pps感染Vero E6細(xì)胞,檢測(cè)膜融合抑制劑氯喹和鹽酸阿比朵爾、SARS-CoV-2 S1蛋白單克隆抗體及新型冠狀病毒肺炎患者恢復(fù)期血清對(duì)假病毒感染性的影響。結(jié)果構(gòu)建的SARS-CoV-2 S質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞可與S1蛋白單克隆抗體及新型冠狀病毒肺炎患者恢復(fù)期血清反應(yīng)。SARS-CoV-2 S質(zhì)粒與HIV假病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞的上清加入Vero E6細(xì)胞和Huh7細(xì)胞36 h和72 h后可分別觀察到細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的EGFP,EGFP陽(yáng)性的Huh7細(xì)胞數(shù)量明顯多于Vero E6細(xì)胞。2種膜融合抑制劑、1株人源S1單克隆抗體及2份新型冠狀病...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 質(zhì)粒載體、細(xì)胞、試劑
    1.2 SARS-CoV-2 S基因設(shè)計(jì)、合成與表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
    1.3 SARS-CoV-2 S基因表達(dá)產(chǎn)物鑒定
    1.4 假病毒制備與感染性檢測(cè)
    1.5 檢測(cè)膜融合抑制劑和S抗體對(duì)SARS-CoV-2 pps感染的影響
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié) 果
    2.1 SARS-CoV-2 S蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá)鑒定
    2.2 SARS-CoV-2 pps感染靶細(xì)胞的鑒定
    2.3 2種膜融合抑制劑對(duì)SARS-CoV-2 pps感染的影響
    2.4 S1單克隆抗體及COVID-19患者恢復(fù)期血清對(duì)SARS-CoV-2 pps感染的影響
3 討 論



本文編號(hào)：3846043