目的構建Cre重組酶系統(tǒng)調控的Unc13基因胰島β細胞條件性敲除小鼠,為Unc13基因在胰島素分泌中扮演的角色和作用機制的體內實驗研究提供更特異的動物模型。方法運用CRISPR/Cas9技術構建Unc13^flox/flox轉基因小鼠,將其與胰島β細胞特異性表達Cre重組酶(Ins2-cre)工具鼠進行雜交,采用聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)和測序等方法對其子代小鼠的基因型進行鑒定,并對該基因敲除(knock out,KO)小鼠及其同窩野生(wild type,WT)小鼠的體質量、糖耐量、胰島素分泌水平進行測定。結果成功構建胰島β細胞特異性Unc13基因條件性敲除小鼠(以下簡稱為Unc13 KO鼠)。進一步研究顯示Unc13 KO鼠與WT鼠相比,體質量無明顯變化,但糖耐量受損,胰島素第一時相分泌下降。結論成功構建了Unc13基因胰島β細胞條件敲除小鼠動物模型,為探討Unc13基因在糖尿病發(fā)生、發(fā)展中的作用提供研究平臺。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗動物
    1.2 采用CRISPR/Cas9技術構建Flox小鼠
        1.2.1 構建打靶載體
        1.2.2 顯微操作與F0代鑒定
        1.2.3 繁育純合突變小鼠
    1.3 Unc13基因胰島β細胞條件敲除小鼠構建
    1.4 小鼠基因型的鑒定
        1.4.1 小鼠尾部基因組DNA提取
        1.4.2 小鼠基因組DNA的PCR擴增反應
        1.4.3 瓊脂糖凝膠電泳及結果分析
    1.5 小鼠腹腔葡萄糖耐量實驗(intra-peritoneal glu-cose tolerance test,IPGTT)及血清胰島素濃度測定
    1.6 統(tǒng)計學方法
2 結果
    2.1 Flox小鼠構建策略
    2.2 F1代雜合Flox小鼠構建及基因型鑒定
    2.3 胰島β細胞條件性敲除鼠構建及基因型鑒定
    2.4 Unc13 KO小鼠葡萄糖代謝能力下降
    2.5 Unc13 KO小鼠胰島素分泌功能受損
3 討論



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