牛乳β-乳球蛋白（β-Lactoglobulin,β-Lg）過敏嚴重影響嬰幼兒的健康成長發(fā)育,臨床癥狀主要表現(xiàn)為頻繁胃食管反流、嘔吐、慢性腹瀉、拒食等,是亟需解決的重要食品安全問題。目前,β-Lg過敏炎癥的確切發(fā)病機理尚不明確。新近研究提示MicroRNA（miRNA）作為腸道黏膜免疫的重要調(diào)控因子,在炎性腸病、病原體感染、腸道腫瘤等多種疾病中發(fā)揮關鍵作用,已成為疾病分子調(diào)控機制研究的熱點。但是,迄今為止鮮見報道剖析miRNA失衡及其靶基因表達在牛乳過敏發(fā)生發(fā)展中作用。故本研究率先利用Illumina/Solexa高通量測序技術篩選過敏小鼠結腸組織中miRNA的表達譜系,對差異表達miRNA進行靶基因預測篩選、基因功能注釋和KEGG信號通路分析。為闡述β-Lg過敏炎癥的發(fā)病機制提供新的理論依據(jù),為過敏炎癥的預治提供新的干預靶點。（1）過敏動物模型的建立和驗證5-6周齡雌性KM小鼠隨機分為正常組和過敏組（n=20）。牛乳過敏組小鼠每周1次進行腹腔注射0.2 mLβ-Lg（1 mg/mL）,共3周。第4周對小鼠進行β-Lg過敏原口服激發(fā)后頸椎脫臼處死。模型構建結束后,對小鼠的過敏體征評分、... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 立題背景
    1.2 牛乳過敏及其引發(fā)的相關炎癥反應
        1.2.1 牛乳過敏的概述
        1.2.2 牛乳過敏引發(fā)的相關炎癥反應
    1.3 miRNA的研究概況
        1.3.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)與命名
        1.3.2 miRNA的生物合成及功能
        1.3.3 miRNA的基本特征及分布
        1.3.4 miRNA的鑒定及檢測方法
        1.3.5 miRNA靶基因的預測與鑒定
    1.4 miRNA在腸道及相關炎癥疾病中的研究
        1.4.1 miRNA在腸道中的功能研究
        1.4.2 miRNA在相關炎癥疾病中的研究
    1.5 本研究的目的意義
    1.6 擬采用的技術路線
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗動物
        2.1.2 主要試劑和來源
    2.2 儀器與設備
    2.3 主要數(shù)據(jù)庫及生物軟件
    2.4 試驗方法
        2.4.1 構建β-乳球蛋白過敏動物模型
        2.4.2 β-乳球蛋白致敏模型驗證評估
        2.4.3 β-乳球蛋白過敏相關抗體及炎癥因子水平變化檢測
        2.4.4 miRNA高通量測序
        2.4.5 差異表達miRNA靶基因預測及功能注釋
        2.4.6 差異表達miRNA及靶基因qRT-PCR驗證
        2.4.7 數(shù)據(jù)分析
3 結果與分析
    3.1 β-乳球蛋白致敏動物模型構建評估
        3.1.1 β-Lg過敏對小鼠體征指標的影響
        3.1.2 β-Lg過敏對相關炎癥抗體及細胞因子的影響
    3.2 Small RNA測序分析
        3.2.1 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量及長度分布
        3.2.2 已知和新miRNA分析鑒定
        3.2.3 miRNA的特征分析
    3.3 β-乳球蛋白過敏炎癥中miRNA差異表達分析
        3.3.1 miRNA差異表達分析
        3.3.2 差異表達miRNA的聚類分析
        3.3.3 差異表達miRNA的qRT-PCR驗證
    3.4 差異miRNA靶基因預測及富集分析
        3.4.1 差異miRNA靶基因預測
        3.4.2 靶基因的GO富集性分析
        3.4.3 靶基因的KEGG通路富集分析
        3.4.4 差異miRNA靶基因的qRT-PCR驗證
4 討論
    4.1 β-乳球蛋白過敏差異miRNA篩選及分析
        4.1.1 β-Lg過敏小鼠miRNA表達譜分析
        4.1.2 β-Lg過敏小鼠差異表達miRNA篩選
    4.2 β-Lg過敏差異miRNA驗證及在相關疾病中的研究
        4.2.1 β-Lg過敏差異表達miRNA驗證
        4.2.2 β-Lg過敏差異表達miRNA在相關疾病中的研究
    4.3 差異表達miRNA靶基因預測及生物信息分析
        4.3.1 差異miRNA靶基因預測及驗證
        4.3.2 差異miRNA靶基因的功能預測分析
5 結論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]高通量測序技術分析急性髓系白血病血漿外泌體微RNA表達譜差異[J]. 田淼,譚三勤,劉靜茹,王曉華,肖紅,葛敏.  中國生物化學與分子生物學報. 2017(02)
[2]miRNA-10a表達與炎癥性腸病患者炎性反應的關系及診斷意義研究[J]. 王麗強,林思彤,邵琦,玄延花.  中國實驗診斷學. 2015(01)
[3]MAPK信號通路在骨關節(jié)炎發(fā)病機制中的研究進展[J]. 高世超,殷海波,劉宏瀟,眭蘊慧.  中國骨傷. 2014(05)
[4]microRNA在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的作用及其機制的研究進展[J]. 馬倩,李向培.  細胞與分子免疫學雜志. 2014(05)
[5]Th17、Treg細胞與銀屑病的關系研究進展[J]. 曠翠娥,陳小紅.  皮膚性病診療學雜志. 2012(05)
[6]PI3K信號通路及其抑制劑抗惡性腫瘤的研究進展[J]. 陳正軍,黃翔.  實用醫(yī)院臨床雜志. 2011(03)

碩士論文
[1]牛乳β-乳球蛋白過敏中Th17/Treg細胞失衡的作用研究[D]. 鄭全玲.東北農(nóng)業(yè)大學 2014
[2]黑腹果蠅基因間與基因內(nèi)microRNA的表達及進化保守性分析[D]. 李亞芳.南京師范大學 2014
[3]銀屑病皮損與正常皮膚組織miRNA表達差異分析[D]. 張靜.天津醫(yī)科大學 2011



本文編號：3170167