目的探究干擾素刺激基因（ISG）12a對(duì)寨卡病毒（ZIKV）復(fù)制的影響和作用機(jī)制。方法通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染（2μg ISG12a）或者siRNA（20μmo/Ll）沉默分別上調(diào)或者抑制A549細(xì)胞（細(xì)胞密度2×10⁵/mL）中ISG12a的表達(dá),再用ZIKV（MOI=1）感染A549細(xì)胞,48 h后收樣,采用RT-qPCR以及Western blot等方法檢測(cè)ZIKV的RNA的復(fù)制水平及宿主抗病毒先天免疫相關(guān)基因表達(dá)水平;將1μg含有干擾素刺激應(yīng)答元件（ISRE）的螢火蟲熒光報(bào)告質(zhì)粒（ISRE-luc）和2 ng海腎熒光質(zhì)粒（pRL-TK）與1μg的ISG12a質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入2×10⁵/mL的A549細(xì)胞中24 h,用ZIKV（MOI=1）感染A549細(xì)胞24 h,用終濃度為100 IU/mL IFNβ再處理細(xì)胞24 h后收樣,用雙熒光報(bào)告基因試驗(yàn)檢測(cè)ISRE活性;在2×10⁵/mL的A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染2μg ISG12a質(zhì)粒,24 h后用ZIKV（MOI=1）感染A549細(xì)胞24 h,用終濃度為100 IU/mL IFNβ再處理細(xì)... 

【文章來源】：中國(guó)輸血雜志. 2020年05期 第446-452頁(yè)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

在mRNA水平抑制ISG12a表達(dá)促進(jìn)ZIKV復(fù)制

RT-qPCR檢測(cè):ZIKV能夠感染A549細(xì)胞,并且隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞內(nèi)病毒RNA水平逐漸增加(圖1-A);隨著時(shí)間的延長(zhǎng),至72 h時(shí)ISG12a表達(dá)明顯增高(圖1-B)。2.2 外源性IFNβ誘導(dǎo)ISG12a高表達(dá)

RT-qPCR檢測(cè):與空載組相比,轉(zhuǎn)染劑量(μg)為0.5、1和2的3組中ISG12a相對(duì)值為12.285 9±0.445 9、23.399 9±3.155 2、42.896 9±1.049 1(P<0.05或<0.01)(圖3-A);實(shí)驗(yàn)組ISG12a相對(duì)值253 3.544 4±74.859 6(P<0.01),ZIKV RNA分子的相對(duì)值為0.438 8±0.011(P<0.01)。WB確認(rèn): ISG12a在蛋白水平成功高表達(dá)(圖3-B)并抑制ZIKV的復(fù)制(圖3-E)。2.4 抑制ISG12a的表達(dá)促進(jìn)ZIKV的復(fù)制


本文編號(hào)：2903185