發(fā)布時間：2020-11-01 06:44

　　 目的建立一種可視化的恒溫擴增方法用于檢測膿腫分枝桿菌(MAB)。方法采用特異性全長erm(41)基因建立基于多交叉置換擴增(MCDA)結合羥基萘酚藍(HNB)的方法,通過比色法直接檢測擴增產物,采用23株膿腫分枝桿菌復合群和8種細菌標準株對該方法進行初步評價。結果建立的MAB-MCDA-HNB檢測限為100 fg的DNA模板。31株細菌菌株中,只有膿腫分枝桿菌檢測結果為陽性,其它細菌包括結核分枝桿菌,卡介苗,馬賽分枝桿菌、鳥分枝桿菌等非結核分枝桿菌和金黃色葡萄球菌等均為陰性。膿腫分枝桿菌模擬痰標本檢測靈敏度為1.7×10~3 CFU/mL(每次反應17 CFU)。結論 MAB-MCDA-HNB方法能夠快速準確診斷膿腫分枝桿菌的感染。
【部分圖文】：

表2 多重交叉置換擴增引物信息Tab.2 MCDA primers information Primers Sequences (5′-3′) Length/bp F1 TGCTAGCCGTCGAGCT 16 CP1 GCAGGTCCGCTTCCGCTATTCGACACCTTCGTTCACG 37 C1 GCAGGTCCGCTTCCGCTAT 19 D1 GACATCTTCCTCGGCAAAC 19 R1 AATGGCCGTCGCGGCCA 17 R2 CCCTACCAAGTCACCAGC 18 D2 ACCTGGTGCTGCAGCG 16 C2 TACGGAGTCTCTTGACGCCGGAAT 24 CP2 TACGGAGTCTCTTGACGCCGGAATGCTTCGCATGTTTGTGC 41 F2 TGGCGAACAGGTGCTC 161.4 MAB-MCDA-HNB測定的標準化

在MAB-MCDA-HNB測定中使用系列稀釋的膿腫分枝桿菌桿菌參考菌株(ATCC 19977)基因組DNA,最后我們證實低至100 fg的DNA模板可以啟動MAB-MCDA反應(圖2)。2.4 測定的特異性和靈敏度

在31種細菌菌株中,只有來自M. abscessus的DNA顯示陽性結果,來自M. massilience、結核分枝桿菌、BCG、M. kansassi、M. smegmatis、M. phlei、M. avium和金黃色葡萄球菌的DNA模板表現為陰性結果(圖3)。2.5 erm(41)PCR產物的片段大小
【相似文獻】

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1 呂恒;張錦海;顧海濤;王平;王長軍;王玉邦;;腸出血性大腸桿菌O157:H7的快速可視化檢測[J];東南國防醫(yī)藥;2013年04期

2 呂恒;張錦海;陳鳳娟;譚維國;顧海濤;王平;王長軍;;大腸埃希菌O157:H7環(huán)介導等溫擴增可視化檢測方法的建立[J];中國病原生物學雜志;2013年04期

3 李玉綠，文建國，盧迪生;酶組化顯示睪丸LDH－X方法的再探討[J];湖南醫(yī)科大學學報;1996年01期

本文編號：2865167