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GMAP210對(duì)雄性小鼠精子發(fā)生及生育能力的作用

發(fā)布時(shí)間:2020-04-28 02:12
【摘要】:目的:探討GMAP210在小鼠精子發(fā)生過程中的作用,分析其對(duì)男性生殖能力的影響,為早期診斷和治療男性不育提供一定的科學(xué)依據(jù)。方法:將Gmap210~(flox/flox)雌性小鼠和stra8-iCre雄性小鼠雜交以獲得條件性敲除(KO)小鼠,以Stra8-iCre;Gmap210f~(lox/+)小鼠作為對(duì)照;Western Blot檢測(cè)野生型小鼠第一波精子發(fā)生過程中GMAP210蛋白的表達(dá);將六周齡Gmap210基因條件敲除雄性小鼠和對(duì)照組雄性小鼠與野生型成年雌性小鼠交配兩個(gè)月,檢測(cè)其生育能力和繁殖能力;收集對(duì)照組和Gmap210基因條件敲除雄性小鼠附睪尾部的精子,光學(xué)顯微鏡下拍照并攝影,精子的形態(tài)、數(shù)量和精子活力;HE染色觀察對(duì)照組和Gmap210基因條件敲除雄性小鼠睪丸和附睪的精子在不同階段的形態(tài)變化;電子顯微鏡觀察對(duì)照組和Gmap210基因條件敲除雄性小鼠睪丸和附睪中的精子的超微結(jié)構(gòu);免疫熒光觀察對(duì)照組和Gmap210基因條件敲除雄性小鼠睪丸生精細(xì)胞中IFT20的定位,以及附睪精子中的頂體形態(tài)和線粒體分布。結(jié)果:GMAP210蛋白在肝臟和睪丸中大量表達(dá),且在小鼠出生后睪丸組織內(nèi)的第一波精子發(fā)生過程中,GMAP210蛋白在16天開始大量表達(dá),第35天表達(dá)最高;Gmap210基因條件敲除雄性小鼠未見任何生長異常,并且都能活到成年;所有的對(duì)照小鼠是可育的,但50%的條件性Gmap210基因敲除小鼠不育,且可育的KO小鼠產(chǎn)仔數(shù)明顯下降;形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示KO小鼠睪丸生精小管結(jié)構(gòu)正常,但是附睪管腔內(nèi)精子頭部異常呈圓形,尾部排列紊亂;光學(xué)顯微鏡下觀察KO小鼠精子尾部正常,但大部分精子的頭部形狀異常;電子顯微鏡下觀察到KO小鼠附睪精子頭部異常,以及軸絲缺失,雖然大部分精子尾巴正常,但一些精子尾部中段缺損;頂體信號(hào)幾乎在生精細(xì)胞和精子中消失,且線粒體高度集中在精子頭部,卻未在尾部中段觀察到特定信號(hào);IFT20的在睪丸生精細(xì)胞中表達(dá)下降,并且在整個(gè)細(xì)胞質(zhì)中都能檢測(cè)到IFT20的信號(hào)。結(jié)論:GMAP210對(duì)于頂體形成,正常線粒體鞘和雄性生育力是必需的,并且雄性生精細(xì)胞中的IFT20定位依賴于正常的GMAP210表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】:武漢科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號(hào)】:R698.2;R-332

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6 趙s,

本文編號(hào):2642934


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