【摘要】：研究背景:近幾年在雌性生殖干細(xì)胞(FGSCs)的分化、增殖和凋亡等方面做了較多研究。但其它的生物學(xué)過程,例如細(xì)胞自噬,以及其在FGSCs中的調(diào)控機(jī)制尚不清楚。此外,小分子化合物因其作用效果具有即時(shí)性和可逆性,在細(xì)胞自噬的機(jī)制研究中發(fā)揮了重要的作用。而苯并硼唑類化合物因其良好的化學(xué)性質(zhì)和廣泛的功能,在臨床研究和治療中具有很大的潛力,但目前為止,尚未有針對(duì)此類化合物在FGSCs中作用的研究報(bào)道。研究目的:探究苯并硼唑類化合物ZCL-082在FGSCs發(fā)育中的作用及其調(diào)節(jié)機(jī)制。研究結(jié)果:在本研究中,我們將化合物ZCL-082(苯并硼唑類雜環(huán)的衍生物)加入FGSCs中以檢測(cè)其作用。通過細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8(CCK8)和5-乙炔基-2'-脫氧尿苷(EdU)檢測(cè),顯示ZCL-082可以顯著降低體外培養(yǎng)FGSCs的活力、增殖率和數(shù)量。除此之外,Western-blot結(jié)果顯示,當(dāng)用ZCL-082處理FGSCs 3 h和6 h之后,微管相關(guān)蛋白中輕鏈3β-II(LC3BII)的表達(dá)量顯著增加,同時(shí)P62蛋白(sequestosome-1,SQSTM1)的表達(dá)量顯著降低,免疫熒光顯示LC3B囊泡數(shù)目也顯著上升,表明FGSCs被ZCL-082誘導(dǎo)發(fā)生了自噬。為探討ZCL-082誘導(dǎo)FGSCs自噬的作用機(jī)制,我們檢測(cè)了該化合物處理細(xì)胞后自噬相關(guān)lncRNA的表達(dá)量變化。結(jié)果顯示,ZCL-082可以顯著降低長(zhǎng)鏈非編碼RNA即生長(zhǎng)停滯特異性5(GAS5)的表達(dá),而GAS5可以直接結(jié)合microRNA-21a(miR-21a)并負(fù)性調(diào)控其表達(dá)。敲除GAS5可以誘導(dǎo)FGSCs的自噬,而GAS5過表達(dá)可以抑制體外FGSCs的自噬�；匮a(bǔ)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,過表達(dá)GAS5可以一定程度的挽救ZCL-082誘導(dǎo)的FGSCs自噬。此外,與對(duì)照組相比,miR-21a的過表達(dá)顯著增強(qiáng)LC3BII蛋白的表達(dá),同時(shí)降低了FGSCs中SQSTM1蛋白的表達(dá)和程序性細(xì)胞死亡蛋白4(Pdcd4)基因的表達(dá)。而抑制miR-21a則顯著降低基礎(chǔ)的或ZCL-082誘導(dǎo)FGSCs中LC3B-II的表達(dá)。與此同時(shí),抑制miR-21a也顯著升高Pdcd4基因的表達(dá),升高基礎(chǔ)的或ZCL-082誘導(dǎo)FGSCs中SQSTM1的表達(dá)。研究結(jié)論:本研究表明,ZCL-082能夠降低體外培養(yǎng)的FGSCs的活力和增殖能力并誘導(dǎo)FGSCs的凋亡和自噬;過表達(dá)GAS5能夠一定程度的挽救ZCL-082引起的FGSCs的自噬;ZCL-082通過GAS5/miR-21a軸誘導(dǎo)FGSCs自噬。這些結(jié)果有助于理解FGSCs的生理功能和發(fā)育機(jī)制并為女性生育力保持和臨床治療生殖障礙性疾病提供新的思路。
【圖文】：

圖 1-1：ZCL-082 處理 FGSCs 后形態(tài)圖及細(xì)胞數(shù)目統(tǒng)計(jì)Figure1-1： ZCL-082 reduced the number of FGSCs. Morphology of FGSCs treated withvarious concentrations of ZCL-082. Scale bar, 50 μm. Number of FGSCs per 35 mm plate atvarious concentrations of ZCL-082. Values are presented as mean ±SEM of three biologicalreplicates. **P < 0.01. (ⅰ:Control, ⅱ:0.125 μM, ⅲ:0.25 μM, ⅳ:0.5 μM, ⅴ:1 μM, ⅵ:2μM, ⅶ:4 μM, ⅷ:8 μM). Control: DMSO.

圖 1-2：ZCL-082 導(dǎo)致 FGSCs 活力降低igure1-2： ZCL-082 reduced the viability of FGSCs. Fold-change in cell viabilitent concentrations was detected by CCK8 assay at 24 h (A) and 48 h (B). Valnted as mean ±SEM of three biological replicates. **P < 0.01.
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R329.2

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6 蘇杜林;王健;;對(duì)2016年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)的解讀與討論[J];中學(xué)生物教學(xué);2017年07期

7 韓翠翠;;細(xì)胞自噬及相關(guān)試題分析[J];中學(xué)生物教學(xué);2017年09期

8 奇云;;細(xì)胞自噬機(jī)制研究緣何摘得諾獎(jiǎng)?——2016年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)解讀[J];生命世界;2016年12期

9 王海杰;譚玉珍;;細(xì)胞自噬機(jī)制開啟疾病治療新途徑[J];解剖學(xué)報(bào);2017年01期

10 林承列;李江;周宜;孫艷紅;王麗華;胡鈞;樊春海;;基于細(xì)胞自噬機(jī)制的健康科學(xué)研究進(jìn)展[J];核技術(shù);2017年02期

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1 許赤;陳文捷;楊楊;李華;易述紅;陳規(guī)劃;;老年大鼠肝臟細(xì)胞自噬及其移植后改變[A];2013中國(guó)器官移植大會(huì)論文匯編[C];2013年

2 劉杰民;紀(jì)云西;蔣歷;黃貴華;鄭超偉;郭超峰;;細(xì)胞自噬是探索中醫(yī)藥微觀機(jī)制的新思路[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)第二十四次全國(guó)脾胃病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2012年

3 郭一;韓海嘯;;細(xì)胞自噬在非酒精性脂肪性肝病作用機(jī)制的研究進(jìn)展[A];第三十屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2018年

4 楊鍵;鄧玉杰;張曉燕;呂鵬飛;徐俊;楊穎;寧光;;脂肪細(xì)胞自噬檢測(cè)方法的建立及意義探討[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)第十六次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

5 趙琳娜;林德貴;;細(xì)胞自噬的分子機(jī)制[A];第六屆西部寵物醫(yī)師大會(huì)論文集[C];2017年

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1 記者 孟婧;細(xì)胞自噬研究目前仍處于初級(jí)階段[N];江蘇科技報(bào);2019年

2 記者 張夢(mèng)然;細(xì)胞自噬關(guān)鍵蛋白突變可延壽[N];科技日?qǐng)?bào);2018年

3 記者 劉海英;美找到刺激細(xì)胞自噬新策略[N];科技日?qǐng)?bào);2018年

4 記者 嚴(yán)粒粒;細(xì)胞自噬與多種疾病密切相關(guān)[N];浙江日?qǐng)?bào);2016年

5 記者白毅;介入細(xì)胞自噬過程可減輕缺血性腦損傷[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

6 記者 張建琛 通訊員 李靜;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)細(xì)胞自噬密碼[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

7 ;細(xì)胞自噬的奧秘被發(fā)現(xiàn)[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

8 小亦;日發(fā)現(xiàn)細(xì)胞自噬奧秘[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

9 常麗君;英發(fā)現(xiàn)控制細(xì)胞自噬過程分子開關(guān)[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

10 記者 錢錚;細(xì)胞自噬作用有“油門”“剎車”[N];新華每日電訊;2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 段秀英;細(xì)胞自噬調(diào)控細(xì)胞質(zhì)內(nèi)蛋白穩(wěn)態(tài)和脂質(zhì)代謝[D];浙江大學(xué);2019年

2 康成容;PI3K/Akt/mTOR介導(dǎo)的細(xì)胞自噬在鉭顆粒促成骨細(xì)胞增殖中的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

3 馬梅生;人源PI3KC3復(fù)合物結(jié)構(gòu)及其膜結(jié)合特征的研究[D];清華大學(xué);2017年

4 苗超峰;Foxd3在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究[D];鄭州大學(xué);2017年

5 王荔娜;HBO1乙酰化酶復(fù)合體參與調(diào)控線粒體功能以及細(xì)胞自噬的分子機(jī)制的研究[D];華東師范大學(xué);2016年

6 朱峗;MSCs調(diào)控STAT3影響肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞自噬通量治療原發(fā)性膽汁性肝硬化的機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

7 張梅;miR-337及細(xì)胞自噬相關(guān)基因LC3B、p62、p53在人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中的功能和意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

8 王志勇;扶正祛邪方對(duì)APP/PS1 HEK293細(xì)胞自噬功能調(diào)節(jié)作用的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

9 馮艷玲;細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Atg7抑制PKM2磷酸化參與Warburg效應(yīng)調(diào)節(jié)影響細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2018年

10 楊萌;γb蛋白抑制細(xì)胞自噬和活性氧迸發(fā)促進(jìn)大麥條紋花葉病毒侵染的分子機(jī)制研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

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1 鄒玲;基于細(xì)胞自噬探討龍蛭湯促進(jìn)腦缺血再灌注損傷大鼠血管新生的作用機(jī)制[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

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3 冉梅花;酒精通過PIASy誘導(dǎo)細(xì)胞自噬促進(jìn)HCV復(fù)制的機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

4 李博;苯并硼唑類化合物ZCL-082誘導(dǎo)小鼠雌性生殖干細(xì)胞自噬的發(fā)生及機(jī)制研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年

5 楊龍燦;雷帕霉素在肝臟缺血再灌注損傷中對(duì)細(xì)胞自噬作用機(jī)制的研究[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

6 侯曉楠;DUB-X在細(xì)胞自噬中的生物學(xué)功能研究[D];廈門大學(xué);2017年

7 朱葉;西蘭花異硫氰酸酯提取及誘導(dǎo)小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞自噬的分子機(jī)制研究[D];浙江科技學(xué)院;2019年

8 韓樂;環(huán)境雌激素雙酚A誘導(dǎo)山羊睪丸支持細(xì)胞自噬發(fā)生的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

9 喬亞梅;細(xì)胞自噬在納米氧化鋅誘發(fā)A549細(xì)胞炎性反應(yīng)中的作用[D];鄭州大學(xué);2019年

10 劉轉(zhuǎn);白藜蘆醇誘發(fā)組織蛋白酶D介導(dǎo)的耐藥性白血病細(xì)胞自噬性死亡[D];蘭州大學(xué);2017年

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本文編號(hào)：2630717