本文關鍵詞：利用體外甲狀腺濾泡模型研究甲狀腺轉錄因子在調控甲狀腺功能中的作用

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【摘要】：目的體外構建二腔室甲狀腺濾泡模型,通過慢病毒載體過表達甲狀腺轉錄因子(TTF-1、PAX-8)后檢測模型二腔室中甲狀腺激素的合成變化,以探討甲狀腺轉錄因子在調控甲狀腺功能中的作用。方法1.取對數(shù)生長期的人甲狀腺上皮細胞株,將其培養(yǎng)于Transwell培養(yǎng)板(Corningò3450)內用于構建二腔室模型,待細胞完全融合隔離了上下腔后,便形成了二腔室模型。以此模型為研究對象,以培養(yǎng)于6孔板的單層細胞作為對照,在基礎培養(yǎng)基添加合適濃度碘、1m IU/L TSH,繼續(xù)培養(yǎng)36小時,采用直接化學發(fā)光法檢測培養(yǎng)液中的FT3、FT4、Tg,采用砷鈰催化分光光度測定方法檢測碘濃度。2.根據(jù)Gen Bank的基因序列設計引物,采用PCR克隆TTF-1、PAX-8序列全長,經(jīng)Eco RI和Bam HI雙酶切的片段與p LVX-puro連接后轉化E.coli感受態(tài)細胞,在含有氨芐青霉素的LB平板上篩選陽性轉化子進行測序鑒定。重組慢病毒載體構建完成后,應用PEI共轉染293T細胞獲得重組慢病毒,獲得的病毒上清經(jīng)滴度測定后可轉染二腔室模型。3.用空載慢病毒轉染的二腔室模型作為對照組,以過表達(TTF1、PAX-8)慢病毒轉染的二腔室模型作為實驗組,采用直接化學發(fā)光法檢測培養(yǎng)液中的FT3、FT4、Tg,采用砷鈰催化分光光度測定方法檢測碘的濃度。結果1.二腔室模型FT3、FT4合成及攝碘量比單層細胞組顯著增加;2.過表達TTF-1及PAX-8,FT3、FT4的合成增多、攝碘量增多;3.過表達TTF-1時FT3、FT4合成量顯著多于過表達PAX-8,但碘的攝取量兩者沒有明顯區(qū)別。結論1.二腔室模型能夠模擬甲狀腺濾泡結構,具備合成甲狀腺激素及攝碘功能。2.利用二腔室模型,證實了甲狀腺濾泡腔內存在FT3、FT4。3.TTF-1或PAX-8過表達上調甲狀腺激素合成,且TTF-1的作用顯著大于PAX-8。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R3416

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