本文關鍵詞：UCHLl對TrkB的去泛素化調(diào)節(jié)及其在學習記憶中的作用

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【摘要】：一、研究目的和背景腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF通過受體酪氨酸激酶B(TrkB)在調(diào)控神經(jīng)元存活、生長發(fā)育、突觸可塑性等方面發(fā)揮重要作用[1],而TrkB的翻譯后修飾直接影響其生物學功能的發(fā)揮。已知TrkB可被泛素化[2],但是其調(diào)控分子和功能尚不清楚。UCHL1屬泛素羧基水解酶家族,在腦中含量豐富,已有報道UCHL1參與神經(jīng)元突觸可塑性的調(diào)控[3]。我們前期質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)UCHL1可與TrkB結合,提示UCHL1可能參與調(diào)控TrkB。本課題主要對UCHL1是否調(diào)控TrkB去泛素化及其生物學功能進行深入研究。二、實驗方法為研究UCHL1對TrkB去泛素化調(diào)節(jié)及對其生物學功能的影響,我們通過構建UCHL1或TrkB相關質(zhì)粒,免疫共沉淀分析UCHL1與TrkB的相互作用及UCHL1對TrkB泛素化的調(diào)節(jié)。通過免疫熒光定量分析、膜表面可裂解生物素檢測TrkB受體分布及內(nèi)吞和再循環(huán)等實驗,分析UCHL1對TrkB去泛素化調(diào)控對TrkB內(nèi)吞、再循環(huán)的影響。我們還通過contextual fear conditioning (CFC)曠場(open field)分析UCHL1對TrkB去泛素化調(diào)控在小鼠學習記憶和運動能力中的作用。三、實驗結果1. TrkB與UCHL1有相互作用免疫共沉淀實驗(co-immunoprecipiTATion, CO-IP)證明TrkB-FL與T1均可與UCHL1相互作用。進一步利用Co-IP,發(fā)現(xiàn)TrkB中JM1區(qū)和UCHL1中75-85氨基酸是兩者結合的必要和充分條件。2. UCHL1調(diào)控TrkB的去泛素化過程通過P4D1及FK1抗體檢測,我們發(fā)現(xiàn)TrkB主要為多個位點單泛素化。通過過表達、干擾UCHL1以及體外去泛素化檢測等驗證UCHL1可調(diào)節(jié)TrkB的去泛素化,并且主要調(diào)控488位點的去泛素化。3. UCHL1參與調(diào)控膜表面TrkB內(nèi)吞以及內(nèi)吞之后的轉運過程TAT-UCHL175-85多肽可通過抑制UCHL1與TrkB-FL的結合進而促進BDNF誘導的TrkB泛素化,進而促進膜表面TrkB的內(nèi)吞,而內(nèi)吞之后的再循環(huán)TrkB減少,更多TrkB內(nèi)吞后降解,最終使得TrkB及其下游信號通路受到抑制。4. TAT-UCHL1 75-85可通過抑制UCHL1與TrkB的結合降低C57小鼠的學習記憶能力通過CFC測試實驗發(fā)現(xiàn)體內(nèi)注射TAT-UCHL1 75-85小鼠CFC過程中獲得受損。四、結論我們發(fā)現(xiàn)UCHL1可通過與TrkB-FL相互作用調(diào)節(jié)TrkB的去泛素化,并影響其BDNF誘導的膜表面TrkB的內(nèi)吞以及內(nèi)吞之后的降解和再循環(huán)過程,從而影響B(tài)DNF-TrkB下游信號通路,進而影響小鼠的學習記憶能力。
【關鍵詞】：TrkB UCHL1 泛素化 膜受體 信號轉導
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R338.64
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號說明10-11
• 前言11-14
• 實驗材料14-21
• 實驗方法21-32
• 實驗結果32-48
• 討論48-51
• 參考文獻51-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文目錄56-57
• 學位論文評閱及答辯情況表57

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