本文關(guān)鍵詞：Ezrin多克隆抗體制作及應用

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【摘要】：構(gòu)建Ezrin原核重組表達載體pET-28a(+)-ezrin,將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中,誘導獲得Ezrin蛋白,將經(jīng)鎳柱親和層析純化后的蛋白分別免疫新西蘭大耳兔和昆明小鼠(KM),獲得抗血清,采用ELISA和Western blotting,免疫熒光測定其效價和特異性。ELISA對抗血清進行效價測定表明抗血清可與抗原發(fā)生特異性免疫反應;通過Western blotting對抗血清進行鑒定表明抗血清可以識別幾種細胞株內(nèi)的特異性條帶,其相對分子量為82 kD,與預測分子量相符;免疫熒光試驗表明抗血清可以識別細胞內(nèi)的Ezrin蛋白,且定位情況與文獻報道相符。最后通過protein G對抗血清進行了純化。結(jié)果表明用該方法制備的Ezrin多克隆抗體有較高的特異性和靈敏度。
【作者單位】： 清華大學生命科學學院;清華大學深圳研究生院生命與健康學部生物醫(yī)藥研究中心和基因與抗體治療重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 原核表達純化 Ezrin蛋白 動物免疫 抗血清 抗體鑒定
【基金】：國家自然科學基金項目(30570960,30900749) 深圳市重點實驗室建設與提升計劃
【分類號】：R392
【正文快照】： 埃茲蛋白(Ezrin)是一種重要的膜-細胞骨架連接分子,屬于ERM家族(Ezrin,Radixin,Moesin)中的一員。ERM家族蛋白的同源性主要體現(xiàn)在他們都在N-末端有一個同源性很高的FERM功能域(FERM domain),以及在C-末端的不同氨基酸位置上有一個關(guān)鍵的、與其激活有關(guān)的蘇氨酸磷酸化位點,FER

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本文編號：1010601