目的探討白細(xì)胞介素(IL)-17F及IL-17受體C(IL-17RC)對大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(PMVECs)表達(dá)的小窩蛋白1(Cav-1)影響。方法將體外培養(yǎng)的大鼠PMVECs分為時效組以及IL-17RC信號通路干預(yù)組;根據(jù)時效組結(jié)果:即IL-17F誘導(dǎo)大鼠PMVECs的Cav-1及其磷酸化表達(dá)峰值的時間,制定IL-17RC信號通路干預(yù)組IL-17F與大鼠PMVECs孵育時間:(1)時效組:100ng/ml的IL-17F刺激0 h、0.5 h、1.5 h、3 h、6 h、12 h、24 h后Western印跡法檢測Cav-1表達(dá)以及0 min、10 min、30 min、60 min、90 min、120 min后檢測Cav-1及其磷酸化(p-Cav-1)表達(dá);(2)IL-17RC信號通路干預(yù)組:si RNA病毒與大鼠PMVECs預(yù)孵育3 d后分成2組,第1組給予100 ng/ml的IL-17F刺激60 min后檢測p-Cav-1表達(dá),第2組給予100 ng/ml的IL-17F刺激24 h后檢測Cav-1表達(dá),各組分別設(shè)對照組、non-si RNA組、IL-17RC-si RNA組、IL...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)器材
        2.1.3 化學(xué)試劑
        2.1.4 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大鼠PMVECs分離培養(yǎng)與鑒定
        2.2.2 IL-17RC-siRNA滴度復(fù)核以及MOI測定、轉(zhuǎn)染與鑒定
        2.2.3 IL-17RC-siRNA轉(zhuǎn)染與鑒定
        2.2.4 細(xì)胞總蛋白提取
        2.2.5 總蛋白定量
        2.2.6 Western-blot檢測
        2.2.7 轉(zhuǎn)膜
        2.2.8 封閉
        2.2.9 一抗孵育
        2.2.10 二抗孵育
        2.2.11 化學(xué)發(fā)光，顯影，定影
        2.2.12 圖象分析
        2.2.13 Cav-1，p-Cav-1，IL-17RC Western-blot過程示意圖
        2.2.14 實(shí)驗(yàn)分組和處理
        2.2.15 統(tǒng)計學(xué)處理
3. 結(jié)果
    3.1 IL-17F對大鼠PMVECs中Cav-1 表達(dá)的影響
    3.2 IL-17F對大鼠PMVECs中Cav-1 及p-Cav-1 表達(dá)的影響
    3.3 IL-17RC-siRNA病毒轉(zhuǎn)染大鼠PMVECs的結(jié)果
    3.4 IL-17RC在IL-17F誘導(dǎo)PMVECs中Cav-1 及p-Cav-1 表達(dá)變化中的作用
4. 討論
5.參考文獻(xiàn)
個人簡歷
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：4027294