發(fā)布時間：2017-05-02 13:04

  本文關(guān)鍵詞：NDRG2基因通過Zc3h12d酶在核轉(zhuǎn)錄因子-κB傳導通路調(diào)控中的作用機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究NDRG2基因與Zc3hl2d酶在核轉(zhuǎn)錄因子(Nuclear Transcription Factor, NF)-κB傳導通路調(diào)控中的作用機制。方法：(1)用脂多糖(LPS)刺激人支氣管氣道上皮(16HBE)細胞株,來構(gòu)建炎性刺激時氣道黏液高分泌模型,用瞬時轉(zhuǎn)染過表達NDRG2和zc3h12d siRNA干擾下調(diào)16HBE,(2)將細胞分成如下組：A：瞬時轉(zhuǎn)染過表達NDRG2組；B：瞬時轉(zhuǎn)染過表達NDRG2組+zc3h12d siRNA干擾下調(diào)組；C：瞬時轉(zhuǎn)染zc3h12d siRNA干擾下調(diào)組；D：轉(zhuǎn)染空白載體組；E：未做任何處理的16HBE細胞作為對照組。(3)倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率,反轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR)檢測氣道黏蛋白(Mucin, MUC) 5AC mRNA的表達水平,酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測IL-1β、IL-6等炎癥因子及MUC5AC的分泌水平,Western印跡法檢測Zc3h12d、NF-κB p65的分泌水平,激光共聚焦法檢測16HBE細胞內(nèi)MUC5AC表達。結(jié)果：(1)NDRG2轉(zhuǎn)染后其蛋白表達明顯增多,提示轉(zhuǎn)染成功。Zc3h12d siRNA轉(zhuǎn)染后,其表達蛋白減少,提示轉(zhuǎn)染成功。光鏡下檢測NDRG2及Zc3h12d的轉(zhuǎn)染效率,結(jié)果顯示NDRG2效率約65%,Zc3h12d轉(zhuǎn)染效率約50%。(2)給予LPS刺激后,RT-PCR測定MUC5AC mRNA較未做任何處理的對照組明顯升高(p0.05)。當細胞過表達NDRG2, RT-PCR測定MUC5AC mRNA較LPS刺激轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組明顯下降(p0.05)。但同時使細胞過表達NDRG2和下調(diào)Zc3h12d, MUC5AC mRNA較單純過表達NDRG2組明顯升高(p0.05),而下調(diào)zc3h12d組無明顯差異(p0.05)。(3)給予LPS刺激后,NF-κB p65的表達較未做任何處理的對照組明顯增多,而Zc3h12d較未做任何處理的對照組明顯減少。當細胞過表達NDRG2, Western-blot法檢測表明Zc3h12d表達較空白轉(zhuǎn)染組增多,而相應的NF-κB p65表達明顯降低(p0.05)。但同時過表達NDRG2和下調(diào)Zc3h12d組,相應的NF-κB p65表達較單純過表達NDRG2組表達明顯升高(p0.05),但較瞬時轉(zhuǎn)染zc3h12d siRNA干擾下調(diào)組無明顯差異(p0.05)。結(jié)論：(1)LPS刺激炎癥因子和MUC5AC分泌增多；(2) NDRG2過表達抑制炎癥因子及MUC5AC的表達；(3)本實驗提示NDRG2和Zc3h12d的表達有相關(guān)性,NDRG2可通過Zc3h12d實現(xiàn)對NF-κB傳導通路的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：核轉(zhuǎn)錄因子-κB NDRG2 Zc3h12d 黏蛋白
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R563.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-13
• 1 材料與方法13-16
• 1.1 主要材料及試劑13
• 1.2 方法13-15
• 1.3 統(tǒng)計學分析15-16
• 2 結(jié)果16-19
• 2.1 重組表達質(zhì)粒其轉(zhuǎn)染細胞表達情況的鑒定16
• 2.2 RT-PCR檢測MUC5AC的轉(zhuǎn)錄水平16-17
• 2.3 Western-blot檢測Zc3h12d、NF-κB p65的表達水平17
• 2.4 ELISA法檢測IL-1β、IL-6炎癥因子及MUC5AC表達水平17-18
• 2.5 激光免疫共聚焦檢測細胞內(nèi)MUC5AC表達水平18-19
• 3. 討論19-22
• 全文總結(jié)22-23
• 參考文獻23-25
• 文獻綜述25-33
• 參考文獻30-33
• 致謝33-34
• 碩士期間發(fā)表的論文34

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