目的:tet（A）基因變異體能夠介導(dǎo)替加環(huán)素低水平耐藥。本研究通過(guò)對(duì)河南地區(qū)產(chǎn)KPC-2酶肺炎克雷伯菌攜帶tet（A）基因變異體的發(fā)生率、水平傳播機(jī)制以及分子流行病學(xué)特征進(jìn)行研究,為控制tet（A）基因變異體的進(jìn)一步播散和臨床有效治療替加環(huán)素不敏感的產(chǎn)KPC-2酶肺炎克雷伯菌提供理論基礎(chǔ)。方法:（1）以2013年11月-2018年11月收集鄭州大學(xué)某教學(xué)醫(yī)院的459株非重復(fù)耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌（Carbapenem-Resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP）為研究對(duì)象,根據(jù)VITEK（?）2藥敏初篩結(jié)果,針對(duì)替加環(huán)素MIC≥0.5μg/mL的菌株進(jìn)行碳青霉烯酶基因和tet（A）基因變異體的檢測(cè)。（2）篩選tet（A）基因陽(yáng)性且產(chǎn)KPC-2酶的CRKP,對(duì)其攜帶的tet（A）基因全長(zhǎng)序列進(jìn)行測(cè)序并分析氨基酸差異,通過(guò)酶切克隆驗(yàn)證tet（A）基因變異體介導(dǎo)替加環(huán)素耐藥表型的功能。（3）通過(guò)微量肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法測(cè)定目標(biāo)菌株對(duì)臨床常用抗菌藥物MIC值;利用PCR篩查目標(biāo)菌株攜帶的其他耐藥基因。（4）利用多位點(diǎn)序列分型對(duì)目標(biāo)菌株進(jìn)行同源性分析。（5）通過(guò)... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：110 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．３?ＡｃｒＡＢ－ＴｏｌＣ結(jié)構(gòu)示意圖［８１】??

力下，介導(dǎo)替加環(huán)素耐??藥的／ｅｆ（Ａ）基因變異體在ＣＲＫＰ中的出現(xiàn)和流行將進(jìn)一步加劇病原菌的多重耐??藥性，導(dǎo)致廣泛耐藥（Ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙ?ｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ，ＸＤＲ）或全耐藥（Ｐａｎｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ，??ＰＤＲ）菌株的產(chǎn)生，從而使得臨床治療陷入無(wú)藥可用的困境。??基因在腸桿菌科細(xì)菌和金黃色葡萄球菌中報(bào)道較多，轉(zhuǎn)座子Ｔｎ川、??Ｔｎ／７２７和插入序列１Ｓ２５７等可移動(dòng)元件攜帶化／（Ａ）基因發(fā)生水平傳播最??常見(jiàn)的紀(jì)／（Ａ）基因位于轉(zhuǎn)座子Ｔｎ７７２７?（如圖１．４所示）。Ｔｎ／７２／是一種Ｔｎ２７亞??家族的轉(zhuǎn)座子，其一端是／？／？及和ｍｃ／？，兩側(cè)為３８ｂｐ反向重復(fù)序列，該結(jié)??構(gòu)稱為轉(zhuǎn)座子Ｔｎ／７２２，可以單獨(dú)轉(zhuǎn)移；另一端包括四環(huán)素耐藥基因如（Ａ）和阻遏??基因如兄兩者方向相反。轉(zhuǎn)座子Ｔｎ／７２／可能是兩個(gè)位于如（Ａ）基因區(qū)域兩??側(cè)的Ｔｎ７?７２２形成復(fù)合轉(zhuǎn)座結(jié)構(gòu)內(nèi)部發(fā)生缺失進(jìn)化而來(lái)。目前，完整的Ｔｎ７７２／??轉(zhuǎn)座子結(jié)構(gòu)在ＧｅｎＢａｎｋ中是罕見(jiàn)的，其截短形式經(jīng)常存在于革蘭氏陰性菌，四??環(huán)素耐藥基因區(qū)域是完整的，而編碼轉(zhuǎn)座功能的基因部分或完全缺失。??ＩｎＨ＇ｎ??Ｔｎ?１７２７?■??丨?ｔｎｐＡＡ?ｐｏｃＭ?，則Ａ＞?ｆ樹ＲＡ｝?ｔｎｐＲ?＾?ｍｃｐ?１??Ｔｎ１７２２、?ＴＵ?）??圖１．４完整轉(zhuǎn)座子Ｔｎ／７２／結(jié)構(gòu)［１００】??１．３結(jié)語(yǔ)??本課題針對(duì)替加環(huán)素不敏感的攜帶／ｅ／（Ａ）基因變異體產(chǎn)ＫＰＣ－２酶ＣＲＫＰ展??開研究，以２０１３年１１月－２０１８年１１月收集鄭州大學(xué)某教學(xué)醫(yī)院的４５９株非重??９??

ｆＪ?Ｔ？＜＊）?Ａ??Ｔｙｐ？Ｊ?Ｔ？？ｉ＼）??ＴｙｐＭ?Ｔｗ?＜Ａ）?Ａ??Ｊ４Ｂ?Ｍ０?Ｊ＾Ｏ?Ｊ？〇?■？邾??ＸｍＭＭＭ?ＴＨ?（Ｋ）?ＱＡ?ＭＬＳＲＱＶｎｉ：ｒＲＱＧＱｔ，＜ＪＣ；ＳＬＡＡｌＴ?Ｓ?Ｉ．ＴＳＩＶＧＰＭ．ＦＴＡＩＹＡＡＪｉｌＴ?ＴＷ＞Ｃ；Ｗ?ＡＷｌＡｆｉＡＡＩ．ＹＭ－ＣＵ＇ＡＬＲＲＧｌＷＳＣ．ＡＣＱＩＷｎＲ：??Ｔｙｉｗ?Ｉ?１Ｈ?（＊＞?ｔ??Ｔｙｐｔｉ?ＴＨ＜ｉｌ＞?，??Ｔ?ＪｒｔｆＡ）?？??ＩＶ｜Ｗ?４?ｌｒｔ?＜Ａ）??圖２．１突變型Ｔｅｔ（Ａ）與野生型Ｔｅｔ（Ａ）氨基酸差異圖??注釋：１、攜帶�。ィ承腿纾ò耍┗蜃儺愺w菌株：１？＞－１６４７；??２、攜帶?Ｔｙｐｅ４?型?ｔｅｒ（Ａ）基因變異體菌株：ＫＰ－１４－３９、ＫＰ－１４Ｍ６、ＫＰ－１４－２－８６?和?１ＣＰ－１５－２－５３。??如圖２．１所示，野生型Ｔｅｔ（Ａ）與Ｔｙｐｅ?１型Ｔｅｔ（Ａ）氨基酸序列存在七處差異??（分別為?Ｉ５Ｒ，Ｖ５５Ｍ，Ｉ７５Ｖ，?Ｔ８４Ａ，?Ｓ２０１Ａ，Ｆ２０２Ｓ?和?Ｖ２０３Ｆ）；野生型?Ｔｅｔ（Ａ）??２７??

【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]腸桿菌科細(xì)菌替加環(huán)素耐藥機(jī)制研究[D]. 何方.浙江大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3359539