目的分離大鼠肺成纖維細(xì)胞和腹腔肥大細(xì)胞作體外培養(yǎng),通過肥大細(xì)胞與肺成纖維細(xì)胞接觸和非接觸共體培養(yǎng)觀察,了解肥大細(xì)胞對肺成纖維細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化及功能的影響。 方法在無菌條件下用胰酶消化法分離成年大鼠肺成纖維細(xì)胞并用免疫組化鑒定,體外培養(yǎng)3代后用作實(shí)驗(yàn)；收集大鼠腹腔灌洗液,在無菌條件下用肥大細(xì)胞分離液分離和純化肥大細(xì)胞,用甲苯胺藍(lán)染色鑒定,實(shí)驗(yàn)分為三組：對照組：正常大鼠肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)；接觸共育組：肥大細(xì)胞與肺成纖維細(xì)胞接觸共體培養(yǎng)；非接觸共育組：肥大細(xì)胞與肺成纖維細(xì)胞非接觸共體培養(yǎng)，用Transwell共育皿區(qū)隔開肥大細(xì)胞和肺成纖維細(xì)胞,每組設(shè)3復(fù)孔,并作細(xì)胞爬片,共培養(yǎng)5天,每日鏡下計(jì)數(shù)肺成纖維細(xì)胞數(shù)量,建立生長曲線,5天后通過免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測肌成纖維細(xì)胞特異性標(biāo)志物α-平滑肌肌動蛋白(a-smooth muscleactin, a-SMA), MTT比色法測定肺成纖維細(xì)胞增殖率,通過ELISA法檢測培養(yǎng)液中bFGF、TGFβ1及Ⅰ型膠原蛋白含量。 結(jié)果①細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示：接觸共育組各時段成纖維細(xì)胞的數(shù)目均較非接觸共育組和對照組明顯增多。接觸共育組中成纖維細(xì)胞增殖數(shù)與非接觸共育組和對照組比較,有明顯差異(P0.05)；非接觸共育組和對照組比較,差異不明顯(P0.05).②MTT結(jié)果：接觸共育組肺成纖維細(xì)胞光密度值明顯高于對照組和非接觸共育組(P0.05),提示接觸共育組肺成纖維細(xì)胞增殖明顯高于對照組和非接觸共育組,非接觸共育組比對照組也高,但差異不明顯(P0.05).③免疫細(xì)胞化學(xué)染色可見接觸共育組有大量α—SMA染色陽性細(xì)胞,與非接觸共育組和對照組比較,α—SMA染色的平均光密度值(IOD)明顯增加,(P0.05),提示接觸共育組肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞明顯增加。非接觸共育組比對照組高,但差異不明顯(P0.05)。④ELISA法檢測結(jié)果提示,在肥大細(xì)胞與肺成纖維細(xì)胞接觸共育培養(yǎng)組,培養(yǎng)液中bFGF、TGFβ1及Ⅰ型膠原蛋白含量明顯高于非接觸共育組和對照組(P0.05),提示接觸共育組肺成纖維細(xì)胞合成Ⅰ型膠原蛋白和分泌bFGF、TGFβ1明顯增加,非接觸共育組比對照組也高,但差異不明顯(P0.05)。 結(jié)論肥大細(xì)胞影響肺成纖維細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)化及膠原合成；肥大細(xì)胞與肺成纖維細(xì)胞緊密接觸有利于bFGF、TGFβ1的合成；肥大細(xì)胞可能通過緊密接觸及合成的bFGF、TGFβ1來促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)化及膠原合成；
【學(xué)位單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R563.9
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 大鼠肺成纖維細(xì)胞和腹腔肥大細(xì)胞體外分離 培養(yǎng)和鑒定
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 肥大細(xì)胞對肺成纖維細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化及功能的影響
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻博期間發(fā)表論文及科研成果目錄
致謝

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1 張近寶,王一葦,劉維永,馬福臣,晏培松;風(fēng)心病中肥大細(xì)胞與心肌纖維化的關(guān)系(英文)[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年16期

2 葉安霞;謝正福;;堿性成纖維細(xì)胞生長因子在肺疾病的研究進(jìn)展[J];國際呼吸雜志;2006年07期

3 白蘊(yùn)紅,王德文,徐在海,楊怡,時振聲,楊瑞彪;放射性間質(zhì)性肺炎的病變規(guī)律及其機(jī)理研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;1993年01期

4 許英蕾,孫建義;成纖維細(xì)胞生長因子與其受體的研究進(jìn)展[J];藥物生物技術(shù);2004年03期

5 崔玉芳,高亞兵,楊紅,夏國偉,熊呈琦,王德文;肝素對成纖維細(xì)胞促增殖作用的研究[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;1998年04期

6 饒寒敏，徐榮輝，朱雅萍，柴本甫;家兔皮膚成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)中的成骨作用（顯微錄像與四環(huán)素標(biāo)記觀察）[J];中華骨科雜志;1995年05期

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9 魯桂蘭,吳中耀,李永平,顏建華,程浩,鄭健墚,張文忻;肥大細(xì)胞對眼眶成纖維細(xì)胞生長的影響[J];中國臨床解剖學(xué)雜志;2004年03期

本文編號：2850536