【摘要】： 急性肺損傷(acute lung injury，ALI)是重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)的常見并發(fā)癥，其確切發(fā)病機(jī)制尚不明確。SAP發(fā)病1周內(nèi)死亡的患者，60％死于ALI／ARDS或伴有ALI／ARDS的多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)，防治肺損傷成為降低SAP死亡率的重要措施。促炎因子拮抗劑或抑炎因子協(xié)同劑的作用是近年來(lái)急性胰腺炎并發(fā)肺損傷防治研究的熱點(diǎn)。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明促炎因子拮抗劑或抑炎因子協(xié)同劑對(duì)急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷(acute pancreatitis-associated acute lung injury，APALI)防治效果明顯，但遺憾的是，對(duì)于人來(lái)說(shuō)，幾乎沒(méi)有明顯的臨床療效。其原因可能與復(fù)雜的炎性因子網(wǎng)絡(luò)相互作用有關(guān)，單一的促炎因子拮抗劑或抑炎因子協(xié)同劑的應(yīng)用，可能導(dǎo)致炎性因子的失衡進(jìn)一步加重；而且這些藥物的藥代動(dòng)力學(xué)和毒性效應(yīng)也限制了這些藥物在伴有MODS的重癥患者中的應(yīng)用。再者，試驗(yàn)大多靶向于發(fā)病早期的一些炎癥介質(zhì)，而事實(shí)上，往往對(duì)患者進(jìn)行干預(yù)治療時(shí)，可能全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)的整個(gè)級(jí)聯(lián)反應(yīng)已經(jīng)啟動(dòng)。而近來(lái)在內(nèi)毒素血癥和膿毒癥中研究頗多且療效明顯的丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate，EP)在急性胰腺炎及其器官功能損傷的可能作用尚未引起足夠的重視。 近來(lái)研究表明丙酮酸乙酯是一種抗氧化劑和活性氧清除劑，并可調(diào)節(jié)多種炎癥介質(zhì)的釋放，包括早期和晚期炎癥介質(zhì)如腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、高遷移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein，HMGB1)等，且無(wú)細(xì)胞毒性。 基于對(duì)以上研究現(xiàn)狀的認(rèn)識(shí)，本研究擬通過(guò)建立簡(jiǎn)便、易復(fù)制、重復(fù)性好的急性壞死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis，ANP)并發(fā)急性肺損傷動(dòng)物模型，探討急性壞死性胰腺炎肺損傷的發(fā)病機(jī)制；觀察丙酮酸乙酯延遲應(yīng)用是否可減輕急性壞死性胰腺炎肺損傷及可能作用機(jī)制；并研究大鼠肺組織高遷移率族蛋白B1的表達(dá)在急性壞死性胰腺炎肺損傷中的作用及意義。 方法 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立及取材：健康雄性Wistar大鼠72只，體重220～250g，隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組(SO)、ANP組及EP治療組。ANP組及EP治療組大鼠予逆行性胰膽管注射5％�；悄懰徕c制作ANP模型，假手術(shù)組大鼠僅開腹并翻動(dòng)十二指腸數(shù)次；EP治療組于制模后經(jīng)尾靜脈或股靜脈延遲給予EP溶液(EP溶于乳酸鈉林格液中，28mM)，每次劑量為40mg／kg。各組大鼠分別于制模后6h、12h及24h取材。 2、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清TNF-α和IL-6水平； 3、比色法檢測(cè)肺組織的髓過(guò)氧化物酶(MPO)水平、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活力； 4、半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)肺組織HMGB1 mRNA表達(dá)：用經(jīng)典的Trizol法進(jìn)行肺組織RNA提取，定量后以其為模板逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，然后用HMGB1引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)； 5、生化法檢測(cè)血清淀粉酶、血氧變化及觀察胰腺、肺組織大體及光鏡下的病理變化。 結(jié)果 1、隨著制模時(shí)間的延長(zhǎng)，ANP組大鼠血清淀粉酶逐漸升高，腹水量逐漸增加，各時(shí)相點(diǎn)動(dòng)物的胰腺組織均存在不同程度的間質(zhì)水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、灶性或片狀出血壞死，胰腺及周圍組織出現(xiàn)脂肪壞死及皂化斑，并伴血性腹水，呈典型的ANP病理改變；同時(shí)肺組織在各時(shí)相點(diǎn)形態(tài)上出現(xiàn)了不同程度的炎細(xì)胞浸潤(rùn)及肺間質(zhì)、肺泡水腫、出血、灶性或大片肺不張等典型的ALI病理改變；在功能方面，PaO_2進(jìn)行性下降； 2、ANP組大鼠肺組織的髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性隨著制模時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，EP治療組與ANP組相比較，肺組織MPO水平均較低，且各時(shí)點(diǎn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05) 3、ANP組血清TNF-α和IL-6水平在制模后6h達(dá)高峰，12h下降，在此兩時(shí)點(diǎn)治療組血清TNF-α和IL-6水平明顯低于ANP組(P＜0.05)； 4、ANP組肺組織HMGB1 mRNA表達(dá)水平在制模后12h明顯升高，至24h仍維持在高水平，治療組肺組織HMGB1 mRNA表達(dá)水平在制模后12、24h明顯低于ANP組(P＜0.05)； 5、ANP組大鼠肺組織的丙二醛(MDA)水平隨著制模時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，而SOD活力則逐漸降低：EP治療組與ANP組相比較，肺組織MDA水平均較低，且在6h及12h組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，SOD活力則均高于ANP組，且各時(shí)點(diǎn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。 6、同期胰腺、肺病理改變治療組比ANP組明顯減輕，且PaO_2均明顯高于ANP組。 結(jié)論 1、逆行性膽胰管注射牛磺膽酸鈉誘導(dǎo)ANP并發(fā)ALI的大鼠模型是成功的，本模型操作方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性好。本模型之ANP早期就合并急性肺損傷，表現(xiàn)為肺組織的炎癥浸潤(rùn)并有功能障礙。 2、�；悄懰徕c誘導(dǎo)ANP發(fā)生后，可能通過(guò)活性胰酶的釋放和中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞的激活，釋放大量損害性炎性介質(zhì)包括細(xì)胞因子如丁NF-α、IL-6等，通過(guò)炎癥介質(zhì)作用導(dǎo)致中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞在肺部浸潤(rùn)、聚集活化，釋放多種損傷因子如多種促炎細(xì)胞因子(TNF-α、HMGB1等)及氧自由基等有害物質(zhì)直接作用于肺組織而致?lián)p傷。 3、�；悄懰徕c誘導(dǎo)ANP發(fā)生后，肺組織HMGB1表達(dá)增高較晚且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，因而可能成為ANPALI防治切實(shí)可行的潛在干預(yù)目標(biāo)，能給ANPALI提供更廣的治療窗。 4、丙酮酸乙酯具有抗氧化作用，且能明顯抑制ANP肺損傷大鼠早期和晚期促炎細(xì)胞因子的釋放和表達(dá)(TNF-α、IL-6、HMGB1)，減輕肺組織病理?yè)p傷程度。與其他專門調(diào)控單一細(xì)胞因子的重組蛋白相比，丙酮酸乙酯在ANP肺損傷發(fā)病后有較長(zhǎng)的“治療窗”。丙酮酸乙酯對(duì)ANP肺損傷的防治具有良好應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R657.51;R563.8
【圖文】：

ANP組和EP治療組的血清淀粉酶水平隨制模后時(shí)間的延長(zhǎng)而增高。同一時(shí)間點(diǎn)的血清淀粉酶水平，ANP組和EP治療組均明顯高于假手術(shù)組;而EP治療組均較ANP組低，且在6h及12h有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表2一1及圖1)。表2一1，各組動(dòng)物血清淀粉酶檢測(cè)值(U/L，x士s)n=8血清淀粉酶檢測(cè)值組別— 6h1Zh24h假手術(shù)組1115士 166116升 1881199士233ANP組3240士432△3743士528△4044士394△EP治療組2799士334△ *3115士429△*3657士365△注:△與假手術(shù)組比較 p<0.05;*與ANP組比較p<0.05。 5555555555555000...................................假手術(shù)組 000................一 一血血清淀粉酶 3000...口....仗....一.1竺男，二，’也 }組口口口EP治療組0......._....}竺二竺!蘭二 _}}} 1111111111111000...............一 一 000一 一 666h12h24hhh時(shí) 時(shí)間 間圖1，血清淀粉酶檢測(cè)值2、動(dòng)脈血氧分壓測(cè)定結(jié)果:ANP組和EP治療組的動(dòng)脈血氧分壓隨制模后時(shí)間的延長(zhǎng)而降低。同一時(shí)間點(diǎn)的血氧分壓水平，ANP組和EP治療組均明顯低于假手術(shù)組;而EP治療組均較ANP組為高，且在12h及24h有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表2一2及圖2)。

ANP組和EP治療組的動(dòng)脈血氧分壓隨制模后時(shí)間的延長(zhǎng)而降低。同一時(shí)間點(diǎn)的血氧分壓水平，ANP組和EP治療組均明顯低于假手術(shù)組;而EP治療組均較ANP組為高，且在12h及24h有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表2一2及圖2)。

同一時(shí)間點(diǎn)的血清TNF一a和IL一6水平，ANP組和EP治療組均明顯高于假手術(shù)組，且二者血清值在6h組即達(dá)到高峰;而EP治療組均較ANP組為低，且在6h、12h組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表2一3、表2一4及圖3、4)表2一3，各組動(dòng)物血清TNF一a檢測(cè)結(jié)果(n幼，x士s)n=8組別血清TNF一a檢測(cè)值12h24h假手術(shù)組ANP組EP治療組55.7土17.337.7士12.2196.3士16.3△131.6士29.6△*90.2士20.1△65.0士16.6△*28.5士 11.882.升28.8△60.5士18.3△注:△與假手術(shù)組比較尸<0.05;*與ANP組比較 p<0.05。

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本文編號(hào)：2783193