【摘要】：目的:克隆害嗜鱗螨2類變應原Lep d2全長基因,構(gòu)建其原核表達載體并表達純化,以此為疫苗對過敏性哮喘小鼠模型進行特異性免疫治療并評價其治療效果。方法:根據(jù)Genbank公布的Lep d2全長核苷酸序列(AY288150.1)合成Lep d2全長基因,將其插入到表達載體p ET28a(+)質(zhì)粒中,得到重組質(zhì)粒p ET28a(+)-Lep d2。重組質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切鑒定后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta菌株中。用IPTG誘導表達,篩選出最適表達條件(IPTG濃度、溫度、時間)后對重組蛋白進行大規(guī)模表達、純化和濃縮。用塵螨提取液致敏BALB/c小鼠建立急性哮喘小鼠模型,用制備的重組蛋白Lep d2對哮喘小鼠進行特異性免疫治療,觀察小鼠癥狀及肺組織病理變化,并以酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定BALF和脾細胞培養(yǎng)液上清中細胞因子IL-5、IL-13、IFN-γ的水平及血清中特異性Ig E(s Ig E)、s Ig G2a抗體水平。結(jié)果:雙酶切鑒定結(jié)果顯示:成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒p ET28a(+)-Lep d2,菌落PCR結(jié)果說明:重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)化Rosetta(DE3),用IPTG誘導表達后,經(jīng)SDS-PAGE電泳和Western blot分析結(jié)果表明:成功表達并純化了重組變應原Lep d2。哮喘小鼠經(jīng)變應原Lep d2特異性免疫治療后,小鼠血清中s Ig E抗體水平較哮喘組明顯降低(P0.01);血清中s Ig G2a抗體水平較哮喘組顯著增高(P0.01),Lep d2治療組BALF和脾細胞培養(yǎng)液上清中IFN-γ濃度均高于哮喘組升高(P0.01)。而Lep d2組BALF和脾細胞培養(yǎng)液上清中IL-5和IL-13則低于哮喘組(P0.01)。說明害嗜鱗螨Ⅱ類變應原Lep d2疫苗可對哮喘小鼠進行有效SIT。結(jié)論:害嗜鱗螨Ⅱ類變應原Lep d2大規(guī)模原核表達成功,且害嗜鱗螨Ⅱ類變應原Lep d2疫苗可有效控制小鼠過敏癥狀并減輕氣道炎癥。
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25

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1 陸維;害嗜鱗螨Ⅱ類變應原Lep d2特異性免疫治療效果分析[D];皖南醫(yī)學院;2015年

本文編號：2760995