本文關鍵詞：5-氮雜-2’脫氧胞苷對子宮內膜癌細胞系增殖及IGFBP7表達的影響

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【摘要】：背景與目的子宮內膜癌(Endometrial cancer,EC)是全球范圍內女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率僅次于子宮頸癌居于第二位,且呈逐年上升趨勢。在中國,僅2012年就有62000個新發(fā)病例,居于女性惡性腫瘤的第九位。但其發(fā)病機制尚不清楚。胰島素樣生長因子結合蛋白7(Insulin-like growth factor binging protein 7,IGFBP7)是分子量為30-k Da的一種分泌蛋白,研究發(fā)現,其在前列腺癌、惡性黑色素瘤、結直腸癌、甲狀腺癌等多種實體腫瘤中表達下降或缺失,其異常表達與Cp G島高甲基化導致基因沉默相關,應用甲基轉移酶抑制劑5-氮雜-2’脫氧胞苷(5-aza-2 deoxycytidine,5-Aza-d C,decitabine)處理后其表達上調,并發(fā)揮抑癌功能。課題組前期研究結果顯示,IGFBP7在子宮內膜癌細胞系中表達下降或缺失,通過脂質體轉染法,使子宮內膜癌細胞系中IGFBP7的表達上調,結果發(fā)現子宮內膜癌細胞的增殖速率降低,凋亡率增加;另外,向子宮內膜癌細胞培養(yǎng)基中加入人重組IGFBP7,發(fā)現其能通過調控MEK/ERK信號通路,抑制子宮內膜癌細胞的增殖。本實驗應用5-氮雜-2’脫氧胞苷處理子宮內膜癌HEC-1A及Ishikawa細胞,觀察其對子宮內膜癌細胞的增殖及對IGFBP7表達的影響,探討其治療子宮內膜癌的可能性。方法(1)四種不同濃度5-Aza-d C(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)分別刺激子宮內膜癌HEC-1A及Ishikawa細胞24、48、72h。應用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法檢測不同濃度5-Aza-d C在不同時間點對子宮內膜HEC-1A及Ishikawa細胞增殖活性的影響,并計算其對兩種腫瘤細胞的抑制率。(2)應用實時熒光定量PCR(q RT-PCR)技術檢測5μmol/L 5-Aza-d C處理72小時前后HEC-1A及Ishikawa細胞中IGFBP7 m RNA的表達變化。(3)應用免疫蛋白印跡(Western blot)法檢測5μmol/L 5-Aza-d C處理72小時前后HEC-1A及Ishikawa細胞中IGFBP7蛋白的表達變化。(4)應用統計軟件SPSS17.0對實驗數據進行統計學分析,定量資料以sx±表示,符合正態(tài)分布的兩組獨立數據間比較采用t檢驗,符合正態(tài)分布的多組定量資料采用單因素方差分析,多個樣本均數間的兩兩比較采用LSD-t法,以α=0.05為檢驗水準結果1 CCK-8法檢測不同濃度5-Aza-d C對子宮內膜癌HEC-1A及Ishikawa細胞增殖活性的影響結果顯示,四種不同濃度5-Aza-d C(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)作用24、48、72h均能抑制HEC-1A及Ishikawa細胞的增殖。相同的藥物濃度,隨著作用時間的延長,細胞增殖率明顯降低,抑制率增加,呈時間依賴性,差異具有統計學意義(P0.05);相同的作用時間,隨著藥物濃度的升高,細胞增殖率明顯降低,抑制率增加,呈劑量依賴性,差異具有統計學意義(P0.05)。2 5-Aza-d C對子宮內膜癌細胞HEC-1A及Ishikawa中IGFBP7 m RNA表達的影響結果顯示,應用5μmol/L 5-Aza-d C處理HEC-1A細胞72小時后,IGFBP7m RNA的相對表達量為19.81±0.80,與處理前相比較,m RNA的表達量明顯上調,差異有統計學意義(P0.05)。5μmol/L 5-Aza-d C處理Ishikawa細胞72h后,其IGFBP7m RNA的表達量為9.39±0.94,與處理前相比較,表達明顯上調,差異具有統計學意義(P0.05)。3 5-Aza-d C對子宮內膜癌細胞HEC-1A及Ishikawa中IGFBP7蛋白表達的影響結果顯示,經5μmol/L 5-Aza-d C處理72小時后,HEC-1A細胞中IGFBP7蛋白的相對表達量為1.64±0.02,與處理前0.74±0.13相比,其表達水平明顯升高,差異有統計學意義(P0.05)。相同條件處理Ishikawa細胞后,IGFBP7蛋白的相對表達量為0.92±0.15,與處理前0.57±0.01相比,其表達水平明顯升高,差異具有統計學意義(P0.05)。結論1.5-Aza-d C對子宮內膜癌HEC-1A及Ishikawa細胞具有增殖抑制作用;2.IGFBP7在子宮內膜癌HEC-1A及Ishikawa細胞中低表達,5-Aza-d C可誘導體外子宮內膜癌細胞系IGFBP7表達,甲基化機制參與了IGFBP7的表達調控。
【關鍵詞】：子宮內膜癌 胰島素樣生長因子結合蛋白7 5-氮雜-2’脫氧胞苷
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 縮略詞表11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-26
• 結果26-29
• 討論29-33
• 結論33-34
• 參考文獻34-38
• 綜述 表遺傳學改變在子宮內膜癌中的研究進展38-56
• 參考文獻48-56
• 個人簡歷及發(fā)表的論文情況56-57
• 致謝57

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