本文關(guān)鍵詞：曲古抑菌素A對卵巢癌細(xì)胞分化、增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景近年來,我國社區(qū)居民疾病譜發(fā)生顯著變化,惡性腫瘤的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢。人類腫瘤是一組由多種因素引發(fā)的疾病,存在大量基因的突變或者異常激活。然而,僅僅以致癌基因和/或抑癌基因的改變,無法解釋腫瘤在發(fā)生發(fā)展過程中的所有現(xiàn)象,還涉及到表觀遺傳學(xué)的改變。表觀遺傳學(xué)是指基因表達(dá)在不改變DNA序列的情況下發(fā)生可遺傳的改變,比如DNA甲基化、組蛋白修飾、micro RNA等等。越來越多的研究表明,表觀遺傳改變也是腫瘤發(fā)生和發(fā)展的主要因素。其中,組蛋白修飾通過改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄活性而受到人們廣泛的關(guān)注。組蛋白修飾是表觀遺傳調(diào)控的重要組成部分,組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)和組蛋白去乙�；�(HDACs)活性的拮抗作用共同維持組蛋白乙�；揎椀钠胶�。在許多腫瘤中,組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)和組蛋白去乙�；�(HDACs)活性之間的平衡發(fā)生了改變。而組蛋白去乙酰化酶抑制劑能夠逆轉(zhuǎn)HDACs的去乙�；饔�,提高組蛋白乙�；�,使與細(xì)胞分化、增殖抑制、細(xì)胞周期阻滯相關(guān)的基因處于轉(zhuǎn)錄激活狀態(tài),從而發(fā)揮腫瘤抑制作用。因此,組蛋白去乙�；敢种苿┦且活惡苡星熬暗目鼓[瘤藥物。目前已被FDA批準(zhǔn)用于治療癌癥的表觀遺傳藥物包括兩種DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)抑制劑和一個(gè)種去乙�；�(HDAC)抑制劑。曲古抑菌素A(TSA)是近年來比較受關(guān)注的一種異羥肟酸型HDAC抑制劑。有研究表明,TSA能特異性抑制組蛋白去乙�；傅幕钚�,發(fā)揮腫瘤抑制作用,但其相關(guān)機(jī)制仍不清楚。研究目的觀察曲古抑菌素A(TSA)對卵巢癌細(xì)胞分化、增殖的影響并初步探討其相關(guān)機(jī)制。研究方法:1、實(shí)驗(yàn)分組以卵巢癌上皮細(xì)胞系HO8910為研究對象,將細(xì)胞分為:對照組(0n M TSA)、100n M TSA實(shí)驗(yàn)組、200n M TSA實(shí)驗(yàn)組、400n M TSA實(shí)驗(yàn)組;2、TSA對卵巢癌細(xì)胞分化影響觀察(1)應(yīng)用倒置顯微鏡觀察對照組(0n M TSA)和200n M TSA實(shí)驗(yàn)組在24h、48、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞形態(tài),并對細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行評估;(2)應(yīng)用Western blot檢測組蛋白H3乙�；恼w水平以及干性標(biāo)記(SOX2和OCT-4)和分化標(biāo)記FOXA2的蛋白表達(dá)水平;3、TSA對卵巢癌細(xì)胞增殖影響觀察(1)應(yīng)用MTT檢測法檢測TSA對卵巢癌細(xì)胞增殖率的影響,應(yīng)用Ed U檢測法檢測TSA對卵巢癌細(xì)胞DNA合成能力的影響;(2)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測TSA對卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞周期分布的影響;(3)應(yīng)用Western blot檢測細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑p21Cip1和細(xì)胞周期蛋白cyclin D1的蛋白表達(dá)水平。4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,實(shí)驗(yàn)計(jì)量資料數(shù)據(jù)均以`x±S表示,首先采用單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行多組間均數(shù)比較,如果組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,則采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行各實(shí)驗(yàn)組與對照組的兩樣本均數(shù)比較。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,p0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1、與對照組相比,200n M TSA實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞在形態(tài)上發(fā)生明顯的改變,是一個(gè)從類圓形-星狀-梭形的形態(tài)轉(zhuǎn)變過程。2、TSA以濃度依賴的方式顯著上調(diào)組蛋白H3乙�；�;TSA處理顯著下調(diào)SOX2和OCT-4的表達(dá)水平,上調(diào)FOXA2的表達(dá)水平。3、與對照組相比,TSA以濃度和時(shí)間依賴方式明顯降低細(xì)胞的增殖率(均p0.05),抑制細(xì)胞DNA合成能力。4、TSA誘發(fā)細(xì)胞周期阻滯在G1期(p0.05),其中,400n M TSA實(shí)驗(yàn)組G1期細(xì)胞比例高達(dá)87.43%(p0.01);且伴隨p21cip1蛋白表達(dá)量的增加和cyclin D1表達(dá)水平的下降。結(jié)論1、曲古抑菌素A(TSA)可誘導(dǎo)卵巢癌HO8910細(xì)胞分化,并發(fā)生細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的轉(zhuǎn)變,可能與分化相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)有關(guān)。2、TSA能抑制卵巢癌HO8910細(xì)胞的增殖能力,使細(xì)胞在G1/S期發(fā)生周期阻滯,與調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：曲古抑菌素A 卵巢癌 組蛋白乙�；� 細(xì)胞分化 增殖
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-13
• 常用縮略詞對照表13-15
• 引言15-17
• 第一部分 曲古抑菌素A對卵巢癌細(xì)胞HO8910分化的影響17-30
• 1.實(shí)驗(yàn)對象與材料17-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)對象17
• 1.2 主要試劑及耗材17-18
• 1.3 主要儀器18-19
• 1.4 溶液配制19-22
• 2.實(shí)驗(yàn)方法22-24
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)分組22-23
• 2.3 倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的改變23
• 2.4 Western blot檢測Ace H3K9以及轉(zhuǎn)錄因子SOX2、OCT-4 和FOXA2的蛋白表達(dá)水平23-24
• 3.統(tǒng)計(jì)分析24-25
• 4.結(jié)果25-27
• 4.1 TSA誘導(dǎo)HO8910細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)變化25
• 4.2 TSA調(diào)節(jié)干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)25-27
• 5.討論27-30
• 第二部分 曲古抑菌素A對卵巢癌細(xì)胞HO8910增殖的影響30-45
• 1. 實(shí)驗(yàn)對象與材料30-35
• 1.1 實(shí)驗(yàn)對象30
• 1.2 主要試劑及耗材30-31
• 1.3 主要儀器31-32
• 1.4 溶液配制32-35
• 2.實(shí)驗(yàn)方法35-39
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)35
• 2.2 實(shí)驗(yàn)分組35-36
• 2.3 Western blot檢測cyclin D1和p21Cip1的蛋白表達(dá)水平36-37
• 2.4 細(xì)胞增殖能力的檢測37-39
• 2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期39
• 3.統(tǒng)計(jì)分析39
• 4.結(jié)果39-42
• 4.1 TSA抑制HO8910細(xì)胞增殖39-40
• 4.2 TSA誘導(dǎo)HO8910細(xì)胞周期阻滯40-42
• 5.討論42-45
• 第三部分 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 綜述 組蛋白去乙�；敢种苿┡c腫瘤治療50-71
• 參考文獻(xiàn)61-71
• 致謝71-72
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文72

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本文編號：474045