本文關(guān)鍵詞：HSF1與XAF1對(duì)子宮內(nèi)膜癌的影響及作用機(jī)制的初步探究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【背景】子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma,EC)作為一組子宮內(nèi)膜上皮性惡性腫瘤嚴(yán)重威脅女性健康,以起源于子宮內(nèi)膜腺體的腺癌最為多見(jiàn)。它是女性生殖系統(tǒng)最多見(jiàn)的惡性腫瘤之一,在我國(guó)其每年的發(fā)病率約占女性生殖系統(tǒng)癌癥的20%~30%,且每年有接近20萬(wàn)的新發(fā)病例,發(fā)病率僅次于宮頸癌。但在一些西方發(fā)達(dá)國(guó)家有大樣本統(tǒng)計(jì)顯示其發(fā)病率遠(yuǎn)高于宮頸癌,在女性生殖系統(tǒng)癌癥排名首位。雖然目前EC的具體發(fā)病機(jī)理仍不完全明確,但隨著近年來(lái)明顯上升的發(fā)病率及死亡率,其早已成為當(dāng)前基礎(chǔ)科研及臨床研究的焦點(diǎn)。熱休克反應(yīng)是在熱應(yīng)激作用下發(fā)生的,以基因表達(dá)和調(diào)控變化為主要特性的一種防御應(yīng)激反應(yīng)。熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(heat shock transcription factor 1,HSF1)為熱休克反應(yīng)的主要調(diào)控者。HSF1可通過(guò)直接或間接介導(dǎo)體內(nèi)許多細(xì)胞活性因子的生物活動(dòng),參與調(diào)控細(xì)胞的多種生理機(jī)能。它的存在使機(jī)體在適應(yīng)不利環(huán)境盡可能延長(zhǎng)生存期的同時(shí)還參與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,因此,對(duì)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有一定推動(dòng)作用。X-染色體連鎖凋亡抑制因子1(XIAP associated factor 1,XAF1)是一種可以拮抗X-染色體連鎖凋亡抑制蛋白(X-chromosome-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)的重要的負(fù)性調(diào)節(jié)因子,可直接與XIAP結(jié)合而迅速阻斷其抑制凋亡的作用,從而逆轉(zhuǎn)XIAP對(duì)細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞的保護(hù)作用。鑒于XAF1結(jié)構(gòu)和功能上的眾多特質(zhì),它已成為降低腫瘤細(xì)胞耐藥性,提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物、細(xì)胞因子治療和放射線治療敏感性的重要突破點(diǎn)。細(xì)胞凋亡的阻滯與惡性腫瘤的發(fā)生及細(xì)胞耐藥性的產(chǎn)生關(guān)系密切,許多化療藥物都是通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而達(dá)到清除腫瘤的目的。因此當(dāng)XAF1呈高水平表達(dá)時(shí)即可導(dǎo)致大量腫瘤細(xì)胞的凋亡,顯著增強(qiáng)化療藥物的作用并有效抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和體內(nèi)腫瘤的形成。那么在子宮內(nèi)膜癌中HSF1與XAF1表達(dá)情況如何?這兩者之間具有怎樣的相關(guān)性?這兩者是否對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖及凋亡具有影響作用?帶著這些疑問(wèn),我們?cè)O(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)中我們驗(yàn)證了HSF1與XAF1在子宮內(nèi)膜癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)了這兩者之間的相互關(guān)系,并于慢病毒感染后的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株中觀察細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期及凋亡等的變化情況,探討此兩種分子在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探究,以期為子宮內(nèi)膜癌的及時(shí)診斷、治療及預(yù)后評(píng)估提供參考�！灸康摹�1.研究并探討HSF1與XAF1在子宮內(nèi)膜癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)及相互作用情況。2.研究并探討HSF1與XAF1對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖,細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響及作用。【方法】1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法(SP法)檢測(cè)正常子宮內(nèi)膜組織及子宮內(nèi)膜癌組織中HSF1與XAF1的表達(dá)情況以及在子宮內(nèi)膜癌不同分化水平狀態(tài)下HSF1與XAF1的表達(dá)情況。運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析上述組織中HSF1、XAF1的表達(dá)與EC臨床病理特征的關(guān)系并對(duì)兩者的相關(guān)性進(jìn)行分析。并通過(guò)對(duì)EC組織與正常子宮內(nèi)膜組織的western blot及q PCR實(shí)驗(yàn)進(jìn)行HSF1與XAF1基因蛋白水平及m RNA水平的檢測(cè)。2.通過(guò)免疫印跡實(shí)驗(yàn)對(duì)子宮內(nèi)膜癌研究中常用的三株細(xì)胞(Ish-ikawa、HEC-1A、RL95-2)進(jìn)行HSF1與XAF1基因表達(dá)水平的檢測(cè),選取表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2作為慢病毒感染模型,并成功構(gòu)建了穩(wěn)定干涉HSF1基因的細(xì)胞株和穩(wěn)定過(guò)表達(dá)XAF1基因的細(xì)胞株。3.通過(guò)western blot及實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HSF1干涉實(shí)驗(yàn)組Lv-sh-HSF1-RL95-2細(xì)胞中XAF1表達(dá)變化;同時(shí)檢測(cè)XAF1過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組Lv-XAF1-RL95-2細(xì)胞中HSF1表達(dá)變化。4.通過(guò)MTT比色實(shí)驗(yàn),流式細(xì)胞儀檢測(cè)及細(xì)胞凋亡水平檢測(cè)來(lái)測(cè)試HSF1被干涉與XAF1基因被過(guò)表達(dá)后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2在增殖能力,細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡中所出現(xiàn)的變化。實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分,第一部分為HSF1基因干涉組,具體分組如下:實(shí)驗(yàn)組Lv-sh-HSF1-RL95-2;組內(nèi)對(duì)照Lv-scramble-RL95-2;空白對(duì)照組control。第二部分為XAF1基因過(guò)表達(dá)組,具體分組如下:實(shí)驗(yàn)組Lv-XAF1-RL95-2;組內(nèi)對(duì)照Lv-cherry-RL95-2;空白對(duì)照組control。【結(jié)果】1.子宮內(nèi)膜癌組織與正常子宮內(nèi)膜組織免疫組化染色結(jié)果顯示:與對(duì)照組(正常子宮內(nèi)膜組織)相比較,HSF1基因在癌組織中的表達(dá)水平明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織;HSF1在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達(dá),其陽(yáng)性表達(dá)率與組織學(xué)分級(jí)相關(guān)(P0.001)、肌層浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P0.05),與手術(shù)病理分期不相關(guān);XAF1在子宮內(nèi)膜癌組織中低表達(dá),其陽(yáng)性表達(dá)率與組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)、手術(shù)病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P0.05)。在初步驗(yàn)證了兩者在癌與非癌組織中的表達(dá)后,我們又在不同分化程度的癌組織中也進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn),免疫組化染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:隨著癌組織分化水平的降低,HSF1基因的表達(dá)呈現(xiàn)逐漸增高趨勢(shì),而XAF1基因的表達(dá)則呈現(xiàn)降低趨勢(shì),以此結(jié)果我們?cè)O(shè)想它們很可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中分別參與并起到了一定的作用,為了能夠進(jìn)一步的探尋其在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用,我們通過(guò)收集的完整病例資料進(jìn)行了相關(guān)性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示兩者之間呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.582,P0.001)。2.體外環(huán)境中,HSF1及XAF1在子宮內(nèi)膜癌三株細(xì)胞中的表達(dá)水平通過(guò)western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在這三株細(xì)胞中,Ish-ikawa中HSF1表達(dá)水平最高,RL95-2次之,HEC-1A最低,而XAF1在Ish-ikawa中表達(dá)水平最低,RL95-2次之,HEC-1A最高,因此我們選取了RL95-2細(xì)胞作為慢病毒感染的對(duì)象,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定和真實(shí)性,在實(shí)驗(yàn)條件下得到最準(zhǔn)確的結(jié)果。3.HSF1干涉實(shí)驗(yàn)組Lv-sh-HSF1-RL95-2細(xì)胞中XAF1表達(dá)較對(duì)照組明顯增高;同時(shí)XAF1過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組Lv-XAF1-RL95-2細(xì)胞中HSF1表達(dá)較對(duì)照組無(wú)明顯變化。4.基于前期HSF1及XAF1負(fù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及成功構(gòu)建的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系為基礎(chǔ),課題組通過(guò)MTT比色實(shí)驗(yàn)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,在HSF1基因干涉組中實(shí)驗(yàn)組Lv-sh-HSF1-RL95-2組細(xì)胞的增殖能力明顯降低,而對(duì)照組Lv-scramble-RL95-2,control細(xì)胞的增殖能力顯著高于實(shí)驗(yàn)組(P0.05)。在XAF1基因過(guò)表達(dá)組中穩(wěn)定過(guò)表達(dá)XAF1的Lv-XAF1-RL95-2組細(xì)胞增殖能力也相比較其他對(duì)照組顯著降低(P0.05)。5.細(xì)胞周期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)分組同上,在HSF1基因干涉組中實(shí)驗(yàn)組與兩個(gè)對(duì)照組(Lv-scramble-RL95-2,control)相比較,實(shí)驗(yàn)組(Lv-sh-HSF1-RL95-2)出現(xiàn)了明顯的G1期阻滯,進(jìn)入S期的細(xì)胞數(shù)量減少,干涉HSF1基因后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2出現(xiàn)了細(xì)胞周期阻滯。在XAF1基因過(guò)表達(dá)組中穩(wěn)定過(guò)表達(dá)XAF1的Lv-XAF1-RL95-2組細(xì)胞與Lv-cherry-RL95-2組和control組相比較,實(shí)驗(yàn)組Lv-XAF1-RL95-2出現(xiàn)了明顯的G1期阻滯,進(jìn)入S期的細(xì)胞數(shù)量減少,穩(wěn)定過(guò)表達(dá)XAF1基因可以導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2也同樣出現(xiàn)細(xì)胞周期阻滯。6.細(xì)胞凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在XAF1基因過(guò)表達(dá)組中穩(wěn)定過(guò)表達(dá)XAF1的Lv-XAF1-RL95-2組與Lv-cherry-RL95-2組和control組相比較,實(shí)驗(yàn)組Lv-XAF1-RL95-2出現(xiàn)了明顯的早期凋亡趨勢(shì)(P0.001),這說(shuō)明穩(wěn)定過(guò)表達(dá)XAF1基因可以導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2在早期就出現(xiàn)大量凋亡。在HSF1基因干涉組中,實(shí)驗(yàn)組與兩個(gè)對(duì)照組(Lv-scramble-RL95-2,control)相比較,實(shí)驗(yàn)組(Lv-sh-HSF1-RL95-2)出現(xiàn)了與過(guò)表達(dá)組相一致的結(jié)果(P0.001),實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞早期凋亡明顯增加,實(shí)驗(yàn)說(shuō)明干涉HSF1基因后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2出現(xiàn)了細(xì)胞早期凋亡率的增加�！窘Y(jié)論】HSF1及XAF1基因參與了多種人類相關(guān)疾病的進(jìn)展過(guò)程,其中就包括腫瘤。在多種腫瘤中都有其對(duì)細(xì)胞增殖,周期和凋亡中發(fā)揮作用的研究。目前,這兩者在子宮內(nèi)膜癌中的相互關(guān)聯(lián)以及這種關(guān)聯(lián)在疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用還尚未有明確報(bào)道。本課題組通過(guò)對(duì)兩者的表達(dá)以及表達(dá)所存在的關(guān)聯(lián)進(jìn)行了分析,并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了兩者在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其發(fā)生的機(jī)制,所有結(jié)果都提示在子宮內(nèi)膜癌中針對(duì)HSF1及XAF1基因?yàn)榘悬c(diǎn)的研究很可能為疾病的基因治療提供新的靶點(diǎn),同時(shí)為突破目前子宮內(nèi)膜癌治療的瓶頸提供新的方向。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜癌 HSF1 XAF1 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-17
• 前言17-19
• 文獻(xiàn)回顧19-42
• 第一部分 子宮內(nèi)膜癌組織中HSF1和XAF1的表達(dá)及相關(guān)性分析42-60
• 引言42
• 1.材料42-45
• 2.方法45-52
• 3.結(jié)果52-57
• 4.討論57-60
• 第二部分 探尋HSF1和XAF1在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的作用機(jī)制60-79
• 引言60-61
• 1.材料61-63
• 2.方法63-68
• 3.結(jié)果68-76
• 4.討論76-79
• 小結(jié)79-81
• 參考文獻(xiàn)81-90
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果90-92
• 致謝92-93

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 趙永福;楊紅星;唐哲;盧賓賓;;胰腺癌組織中XAF1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)及XAF1蛋白的表達(dá)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年05期

2 朱傳東;王禮學(xué);郭晶晶;耿杰;徐瀚峰;張全安;鄭勤;;XAF1基因?qū)樸K誘導(dǎo)肺腺癌A549細(xì)胞凋亡作用的研究[J];中華腫瘤防治雜志;2013年19期

3 高文信;王翔;魏秀峰;陳英新;張娟;朱來(lái)寬;;XIAP、XAF1在正�？谇火つそ腔�(xì)胞和Tca8113細(xì)胞中的表達(dá)與定位[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2006年11期

4 張福全;黃秉韜;段善州;陳勇兵;;XAF1基因?qū)β闶蠓伟┮浦擦錾L(zhǎng)的影響[J];江蘇醫(yī)藥;2014年06期

5 ;[J];;年期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張峰;吳李鳴;周琳;陳齊興;謝海洋;馮曉文;鄭樹(shù)森;;XAF1基因的表達(dá)和甲基化對(duì)肝移植后肝癌復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值[A];2008年浙江省外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 邢召全;前列腺癌中XAF1表達(dá)及生長(zhǎng)抑素對(duì)其表達(dá)調(diào)節(jié)的研究[D];山東大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 周卓;HSF1與XAF1對(duì)子宮內(nèi)膜癌的影響及作用機(jī)制的初步探究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 蘇永超;甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑對(duì)肺腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)及XAF1基因表達(dá)影響的研究[D];蘇州大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：HSF1與XAF1對(duì)子宮內(nèi)膜癌的影響及作用機(jī)制的初步探究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：424477