目的:神經(jīng)管畸形(neural tube defects,NTDs)是一種常見(jiàn)的出生缺陷,通常是由胚胎發(fā)育早期神經(jīng)管閉合不完全或者閉合失敗引起的。NTDs的發(fā)病率在1‰-5‰,其危險(xiǎn)因素涉及環(huán)境、生物、遺傳、輻射和化學(xué)藥品等。NTDs作為一種復(fù)雜的多基因疾病,目前尚不清楚其具體病因,其遺傳因素中的基因突變或各信號(hào)通路中分子間的相互作用和表達(dá)調(diào)控機(jī)制異常,可能在NTDs的發(fā)生中起著重要作用。細(xì)胞凋亡又稱(chēng)細(xì)胞程序性死亡,在胚胎發(fā)育、組織器官形態(tài)形成和功能確定等生命活動(dòng)中普遍存在并發(fā)揮著重要作用。研究表明,在神經(jīng)管發(fā)育過(guò)程中,由于自身基因缺陷或其他因素引起的細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的功能紊亂,打破了細(xì)胞增殖與凋亡的動(dòng)態(tài)平衡,則會(huì)導(dǎo)致NTDs的發(fā)生。在前期研究中,我們分別發(fā)現(xiàn)microRNA-322(miR-322)和前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9型(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)在NTDs中低表達(dá):在糖尿病引起的NTDs中,mi R-322低表達(dá),且抑制高糖誘導(dǎo)的小鼠神經(jīng)干細(xì)胞凋亡;在對(duì)E11孕鼠血清的蛋白質(zhì)組的分析中發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相...

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

在孕小鼠E8.5灌胃給予ATRA(70mg/kg),制造胎鼠NTDs模型,并于E9.5觀察胚胎發(fā)育形態(tài)。如圖1.1A所示,對(duì)照組小鼠胚胎發(fā)育正常,尾部圓潤(rùn)飽滿(mǎn),神經(jīng)管閉合;NTDs組小鼠胚胎表現(xiàn)出發(fā)育遲緩,胚胎體積較小,且神經(jīng)管閉合失敗。隨后,使用HE染色觀察胎鼠骶尾部神經(jīng)管形態(tài)....

隨后,對(duì)兩組E9.5小鼠胚胎中miR-322和NOX4的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。如圖1.2A所示,使用qRT-PCR檢測(cè)miR-322的表達(dá)情況,在NTDs小鼠胚胎中miR-322表達(dá)水平明顯下調(diào);使用WesternBlot檢測(cè)NOX4蛋白的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)NOX4在NTDs組表達(dá)明顯....

此外,采用免疫熒光和TUNEL雙染檢測(cè)NOX4與細(xì)胞凋亡之間的關(guān)聯(lián)。如圖1.3A、1.3B所示,在E9.5小鼠胚胎中,NOX4蛋白廣泛表達(dá),且在NTDs組表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組。通過(guò)免疫熒光與TUNEL雙染發(fā)現(xiàn),TUNEL陽(yáng)性信號(hào)更多的與高表達(dá)NOX4的細(xì)胞共定位。圖1.3C展示....

生物信息網(wǎng)站(microRNA.org,TargetScan,starBase.)預(yù)測(cè)提示NOX4可能作為miR-322的候選靶基因。如圖1.4所示,在NOX4mRNA的3’UTR存在一個(gè)miR-322的潛在結(jié)合位點(diǎn)(2437-2460)。RNApulldown實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證NO....

本文編號(hào)：4011475