本文關(guān)鍵詞：人子宮內(nèi)膜腺癌來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的分離鑒定及生物學(xué)特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:分離培養(yǎng)并鑒定子宮內(nèi)膜腺癌組織來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(Endometrial adenocarcinoma derived Mesenchymal Stem Cells,ECMSCs),比較其與正常子宮內(nèi)膜組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(Endometrium derived Mesenchymal Stem Cells,EMSCs)的生物學(xué)特性差異,為研究子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制、侵襲轉(zhuǎn)移及對(duì)腫瘤微環(huán)境的影響提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.無(wú)菌條件下獲取子宮內(nèi)膜腺癌組織,經(jīng)Ⅱ型膠原酶消化后種植于培養(yǎng)瓶中,用含有10%FBS的α-MEM培養(yǎng)基培養(yǎng),采用組織貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)子宮內(nèi)膜腺癌組織來(lái)源MSCs,0.25%胰酶消化傳代,同時(shí)取正常子宮內(nèi)膜組織來(lái)源MSCs做對(duì)照培養(yǎng)。顯微觀察子宮內(nèi)膜腺癌和正常子宮內(nèi)膜組織來(lái)源MSCs細(xì)胞形態(tài),瑞氏-姬姆薩染色觀察細(xì)胞核質(zhì),CCK8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn),流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型及細(xì)胞周期。誘導(dǎo)MSCs向脂肪、成骨細(xì)胞分化,通過(guò)油紅O染色檢測(cè)成脂誘導(dǎo)分化能力,堿性磷酸酶染色及Von Kossa染色檢測(cè)成骨誘導(dǎo)分化能力,并提取總RNA進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)相關(guān)成脂成骨轉(zhuǎn)錄因子的相對(duì)表達(dá)量變化。2.對(duì)分離鑒定得到子宮內(nèi)膜腺癌及正常子宮內(nèi)膜組織來(lái)源MSCs進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)能力的檢測(cè),通過(guò)淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(Lymphocyte transformation test,LTT)和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)實(shí)驗(yàn)(Mixed Lymphocyte Reaction,MLR)檢測(cè)MSCs抑制T細(xì)胞增殖的免疫調(diào)節(jié)能力。并通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)兩種MSCs的免疫相關(guān)因子IL-6、IL-10、VEGF和TGF-β1的表達(dá)差異性。結(jié)果:1.從子宮內(nèi)膜腺癌組織中可培養(yǎng)出貼壁生長(zhǎng)的成纖維樣的細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭狀,旋渦狀和放射狀排布,原代生長(zhǎng)緩慢,經(jīng)α-MEM培養(yǎng)基培養(yǎng)傳代后生長(zhǎng)迅速,凍存復(fù)蘇后仍保持較強(qiáng)的增殖能力;經(jīng)CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,繪制子宮內(nèi)膜腺癌來(lái)源MSCs的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn),細(xì)胞呈“S”型曲線(xiàn)生長(zhǎng);流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期,可見(jiàn)80%左右細(xì)胞分布在G0/G1期,檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞標(biāo)記物,細(xì)胞表達(dá)CD73、CD90、CD105、CD166、HLA-ABC,不表達(dá)CD14、CD34、CD45、CD31、HLA-DR,提示分離得到的細(xì)胞符合MSCs的干細(xì)胞特征;此分離得到的細(xì)胞可經(jīng)誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞,油紅O染色可見(jiàn)有大量脂滴出現(xiàn),RT-PCR檢測(cè)可見(jiàn)脂肪分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子PPAR-γ2的顯著表達(dá);經(jīng)成骨誘導(dǎo)14天,可見(jiàn)堿性磷酸酶染色陽(yáng)性,誘導(dǎo)28天Von-Kossa染色可見(jiàn)鈣化骨結(jié)節(jié)形成;RT-PCR檢測(cè)可見(jiàn)成骨關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Osteocalcin的表達(dá),說(shuō)明從子宮內(nèi)膜腺癌組織中成功分離得到MSCs。2.對(duì)從子宮內(nèi)膜腺癌組織中分離得到的MSCs的免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行檢測(cè)。LTT結(jié)果顯示子宮內(nèi)膜腺癌組織來(lái)源MSCs能有效抑制經(jīng)由Con A刺激的T淋巴細(xì)胞增殖,且隨著MSCs數(shù)量的增加,其抑制能力逐漸增強(qiáng),呈現(xiàn)劑量依賴(lài)效應(yīng);與之相近,MLR結(jié)果證實(shí)MSCs也可抑制異體淋巴細(xì)胞作為抗原刺激T細(xì)胞增殖的過(guò)程,且伴隨MSCs用量增加,其抑制作用更顯著。通過(guò)RT-PCR檢測(cè)MSCs中各免疫因子表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜腺癌組織來(lái)源MSCs中IL-10、VEGF、TGF-β1的表達(dá)高于正常子宮內(nèi)膜組織來(lái)源MSCs,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),IL-6差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.從子宮內(nèi)膜腺癌組織中分離培養(yǎng)出MSCs,子宮內(nèi)膜腺癌組織來(lái)源MSCs和正常子宮內(nèi)膜組織來(lái)源MSCs形態(tài)主要以長(zhǎng)梭形為主,呈旋渦狀生長(zhǎng)排布。2.子宮內(nèi)膜腺癌組織來(lái)源MSCs表達(dá)CD73、CD90、CDCD105、CD166、HLA-ABC,不表達(dá)CD14、CD31、CD34、CD45、HLA-DR,細(xì)胞周期及細(xì)胞表面標(biāo)記物符合干細(xì)胞特征。3.子宮內(nèi)膜腺癌組織來(lái)源MSCs具有分化成脂肪及成骨細(xì)胞的能力,其成脂分化能力強(qiáng)于正常子宮內(nèi)膜組織來(lái)源MSCs,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.體外LTT和MLR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示子宮內(nèi)膜腺癌組織來(lái)源MSCs及正常子宮內(nèi)膜組織來(lái)源MSCs均具有低免疫源性和免疫調(diào)節(jié)功能,子宮內(nèi)膜腺癌組織來(lái)源MSCs對(duì)于T淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用強(qiáng)于正常子宮內(nèi)膜組織來(lái)源MSCs,可能與子宮內(nèi)膜腺癌腫瘤生長(zhǎng)微環(huán)境及腫瘤細(xì)胞免疫逃逸相關(guān)。5.子宮內(nèi)膜腺癌組織來(lái)源MSCs相關(guān)細(xì)胞免疫因子IL-10、VEGF、TGF-β1的表達(dá)高于正常子宮內(nèi)膜組織來(lái)源MSCs,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),可能與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 子宮內(nèi)膜腺癌 生物學(xué)特性 免疫調(diào)節(jié)功能
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 英文縮略詞5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 材料及方法15-28
• 結(jié)果28-44
• 討論44-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 附錄：個(gè)人簡(jiǎn)歷57-58
• 致謝58-59
• 綜述59-66
• 參考文獻(xiàn)63-66

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本文編號(hào)：299923