目的:深入研究黑色素瘤相關抗原A3(melanoma-associated antigen-A3,MAGE-A3)基因在宮頸癌組織、宮頸癌細胞株Hela、SiHa、C-33 A及正常宮頸細胞株End1/E6E7中的表達情況,探討腫瘤特異性抗原MAGE-A3作為宮頸癌免疫治療特異性靶位的可能性,并為進行機制性研究提供模型和奠定基礎。方法:選取河北大學附屬醫(yī)院婦科2015年1月至2017年1月間首診并行婦科手術患者的宮頸組織。收集存檔蠟塊標本,其中正常宮頸組織20例,宮頸癌組織40例。所有病例均需經病理診斷證實,所有患者均排除患其他惡性腫瘤疾病或急慢性疾病。同時培養(yǎng)宮頸癌細胞株HeLa、SiHa、C-33 A及作為正常對照的細胞株End1/E6E7。應用免疫組織化學SP法檢測MAGE-A3在40例宮頸癌組織和20例正常宮頸組織中的表達。采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測MAGE-A3 mRNA在三種不同宮頸癌細胞株及正常宮頸細胞株中的表達情況。應用蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測MAGE-A3蛋白在三種不同宮頸癌細胞株(HeLa、SiHa和C-33 A)及正常宮頸細胞株(End1/E6E7)中的表達水平。結果:1.免疫組化法顯示:MAGE-A3主要表達于細胞質中,呈淺黃色至棕褐色。MAGE-A3在正常宮頸組織和宮頸癌組織中陽性表達率分別為0%(0/20)和70%(28/40)。在20例正常宮頸組織中MAGE-A3均呈陰性表達,在40例宮頸癌組織中28例呈陽性表達,12例呈陰性表達。宮頸癌組表達高于正常宮頸組,差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=26.25,P0.05)。2.實時熒光定量PCR法顯示:以GAPDH mRNA為內參照標準,檢測基因MAGE-A3的mRNA水平結果顯示,End1/E6E7、HeLa、SiHa、C-33 A的相對定量值分別為0.124±0.003、0.973±0.004、0.902±0.030與0.943±0.017。MAGE-A3 mRNA的相對表達量在宮頸癌細胞組中明顯高于正常宮頸細胞組,經統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn),宮頸癌細胞組與正常宮頸細胞組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而三種宮頸癌細胞之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.Western bloting蛋白印跡顯示:檢測宮頸細胞中MAGE-A3蛋白表達水平結果顯示,MAGE-A3蛋白在三株宮頸癌細胞和正常宮頸細胞中的表達與mRNA相似,End1/E6E7、HeLa、SiHa、C-33 A的相對灰度值分別為0.094±0.029、1.005±0.056、0.975±0.026與0.984±0.032,宮頸癌細胞組中的MAGE-A3蛋白的相對表達量均明顯高于正常宮頸細胞,經統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn),宮頸癌細胞組與正常宮頸細胞組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而三種宮頸癌細胞之間差異無統(tǒng)計學意義。結論:MAGE-A3在宮頸癌組織和宮頸癌細胞中高表達,提示在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中MAGE-A3可能具有重要作用�？梢�,MAGE-A3有可能成為宮頸癌免疫治療的理想靶點,也能幫助宮頸疾病的早期診斷。未來,利用其制備多基因聯(lián)合修飾的腫瘤基因工程疫苗,精確地診斷、判斷預后,并且在腫瘤疾病中做功能性靶向治療等值得期待。所以,研究MAGE-A3基因對進一步了解宮頸癌細胞的生物學行為及判斷預后有很重要的臨床應用價值。
【學位單位】：河北大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

織化學 SP 法檢測宮頸組織中 MAGE-A3 的表性表達主要于細胞質中，呈淺黃色至棕褐色（圖 1、圖組織中陽性表達率分別為 0%（0/20）和 70%（28/40）E-A3 均呈陰性表達，在 40 例宮頸癌組織中 28 例呈陽性宮頸癌組表達高于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計學意義（2χ表 3-1 宮頸組織中 MAGE-A3 蛋白表達的陽性比例類別 例數(shù) MAGE-A3 蛋白的表達 陽性率陰性 陽性常宮頸 20 20 0 0%頸癌 40 12 28 70%

圖 3-2 宮頸癌組織中 MAGE-A3 蛋白的表達，SP ×20R 檢測宮頸細胞中 MAGE-A3 mRNA 的表達 mRNA 為內參照標準，RT-PCR 檢測基因 MAGE-A3 的進行統(tǒng)計學分析。結果顯示，End1/E6E7、HeLa、SiHe quantificaton，RQ）分別為 0.124±0.003、0.973±0.004 3）。MAGE-A3 mRNA 的相對表達量在宮頸癌細胞組統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)，宮頸癌細胞組與正常宮頸細胞組間差三種宮頸癌細胞之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

第三章 結果白印跡法檢測宮頸細胞中 MAGE-A3 法檢測宮頸細胞中 MAGE-A3 蛋白表達水平結頸癌細胞和正常宮頸細胞中的表達與 mRNA 相、C-33 A 的相對灰度值分別為 0.094±0.029、12（圖 5），宮頸癌細胞組中的 MAGE-A3 蛋白，經統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)，宮頸癌細胞組與正常宮，而三種宮頸癌細胞之間差異無統(tǒng)計學意義。HeLa SiHa C-33A End1/E6E7
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本文編號：2840372