目的：本論文通過(guò)對(duì)人類(lèi)精子進(jìn)行自發(fā)頂體反應(yīng)率的檢測(cè),并探討精子自發(fā)頂體反應(yīng)率與ART結(jié)局相關(guān)性關(guān)系的前瞻性研究,包括自發(fā)頂體反應(yīng)率與AI結(jié)局(夫精I(xiàn)UI妊娠率、供精I(xiàn)CI妊娠率)、IVF結(jié)局(夫精I(xiàn)VF受精率、供精I(xiàn)VF受精率)的相關(guān)性關(guān)系探討,期待確定精子自發(fā)頂體反應(yīng)的檢測(cè)是否具有真正意義的臨床預(yù)測(cè)性,建立一套自發(fā)頂體反應(yīng)檢測(cè)的評(píng)估體系,通過(guò)評(píng)估精子自發(fā)頂體反應(yīng)率,提高預(yù)測(cè)樣本生育力的準(zhǔn)確性,為進(jìn)行ART治療的夫婦在選擇正確的治療方案提供一定的臨床指導(dǎo)意義。 方法：選取我院接受AI(夫精I(xiàn)UI、供精I(xiàn)CI)、IVF(夫精I(xiàn)VF、供精I(xiàn)VF)治療的不孕夫婦,其夫精精液、供精精液經(jīng)精液制備處理后,取微量精液通過(guò)FITC-PSA熒光染色,×400熒光顯微鏡下至少計(jì)數(shù)200個(gè)精子分別檢測(cè)自發(fā)頂體反應(yīng)率。隨后根據(jù)分別符合夫精I(xiàn)UI、供精I(xiàn)CI、夫精I(xiàn)VF、供精I(xiàn)VF治療指征的不孕不育夫婦臨床病例資料選擇納入研究的對(duì)象組,使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS16.0對(duì)精子自發(fā)頂體反應(yīng)率與精液各參數(shù)、ART臨床結(jié)局進(jìn)行相關(guān)性分析,使用ROC曲線分析篩選出各研究對(duì)象組中對(duì)臨床治療方案選擇有指導(dǎo)意義的最佳閾值,期待建立一套自發(fā)頂體反應(yīng)檢測(cè)的參考值體系。本研究已申報(bào)倫理審查并已獲倫理委員會(huì)批準(zhǔn),批件號(hào)：LL-SC-SG-2013-014。 結(jié)果：(1)接受夫精I(xiàn)UI治療的不孕不育夫婦,夫精精子自發(fā)頂體反應(yīng)率與精液處理前后密度、精液處理前后(C+D)級(jí)精子數(shù)正相關(guān),與精液處理前后活率負(fù)相關(guān)。(2)接受夫精I(xiàn)VF治療的不孕不育夫婦,ROC曲線分析篩選出診斷低受精率(IVF卵母細(xì)胞受精率50%)的夫精精子自發(fā)頂體反應(yīng)率的最佳閾值為4.4%,夫精精子自發(fā)頂體反應(yīng)率與精子正常形態(tài)率、精液處理前密度、精液處理前活率、精液處理前前向運(yùn)動(dòng)精子百分率、精液處理前后A級(jí)精子百分率、精液處理前B級(jí)精子百分率負(fù)相關(guān),精液處理前C級(jí)精子百分率、精液處理前D級(jí)精子百分率正相關(guān)。(3)接受供精I(xiàn)VF治療的不孕不育夫婦,供精精子經(jīng)雙層密度梯度離心制備處理后,ROC曲線分析篩選出診斷低受精率的供精精子自發(fā)頂體反應(yīng)率的最佳閾值為17.62%,自發(fā)頂體反應(yīng)率與精液處理后密度、IVF受精率負(fù)相關(guān)；供精精子經(jīng)微量密度梯度離心制備處理后,ROC曲線分析篩選出診斷低受精率的供精精子自發(fā)頂體反應(yīng)率的最佳閾值為25.36%,自發(fā)頂體反應(yīng)率(按25.36,≥25.36)進(jìn)行分組,兩組間IVF受精率有顯著性差異。(4)接受供精I(xiàn)CI治療的不孕不育夫婦,精子自發(fā)頂體反應(yīng)率與冷凍復(fù)蘇率正相關(guān)。(5)精液經(jīng)上游法制備處理后檢測(cè)的自發(fā)頂體反應(yīng)率顯著低于雙層密度梯度離心。 結(jié)論：(1)對(duì)接受夫精I(xiàn)UI、供精I(xiàn)CI治療的不孕不育夫婦,精子自發(fā)頂體反應(yīng)率對(duì)臨床妊娠的預(yù)測(cè)價(jià)值仍需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。(2)對(duì)夫精I(xiàn)VF、供精I(xiàn)VF治療的不孕不育夫婦,雖然ROC曲線分析給出cut-off值,但兩組間IVF受精率均大于70%,對(duì)決定臨床治療方案指導(dǎo)意義不大。(3)不同的精液制備方法、冷凍損傷對(duì)精子自發(fā)頂體反應(yīng)率有一定影響。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類(lèi)】：R714.8
【部分圖文】：

每張涂片添加一滴1滴焚光封固液，對(duì)精子涂片焚光進(jìn)行封固。在激發(fā)光450-490nm，x400倒置焚光顯微鏡下觀察結(jié)果，每張精子涂片根據(jù)不同精子分類(lèi)至少計(jì)數(shù)200個(gè)精子，每份精子標(biāo)本重復(fù)計(jì)數(shù)兩張精子涂片，計(jì)算自發(fā)頂體反應(yīng)率。(7)結(jié)果判定與計(jì)算：根據(jù)X400焚光光學(xué)顯微下觀察結(jié)果，并拍照記錄染色效果。精子分為兩類(lèi)：1、頂體完整(AI):精子頭部一半以上發(fā)明亮的均勻的焚光2、頂體反應(yīng)(AR):分為3種類(lèi)型，包括頂體區(qū)斑點(diǎn)狀著色、僅赤道帶出現(xiàn)焚光、頂體區(qū)無(wú)焚光著色(包括精子表面沒(méi)有焚光、僅頂體后區(qū)有焚光兩種類(lèi)型）。3、自發(fā)頂體反應(yīng)率（％)=(發(fā)生自發(fā)AR的精子數(shù)/被觀察顯微鏡下所計(jì)精子總數(shù)）XI00%2結(jié)果2.1 X400焚光顯微鏡下精子自發(fā)頂體反應(yīng)辨別標(biāo)準(zhǔn)

圖4三號(hào)樣本FITC-PSA焚光染色圖片a:頂體完整精子（AI);b:頂體反應(yīng)精子（AR); d:頂體反應(yīng)精子（AR)2.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析：使用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間連續(xù)性變量的比較采用t檢驗(yàn)，分類(lèi)資料采用卡方檢驗(yàn)2.3.1精液處理前各參數(shù)均值在我院門(mén)診進(jìn)行相關(guān)精液檢查不育男性，按照WHO第5版《人類(lèi)精液檢驗(yàn)與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)》，精液體積、密度、活力正常精液標(biāo)本共40份，精液處理前各參數(shù)均值見(jiàn)表1。

6.49±3.50%, 9.94±4.88%,具有極顯著性差異（PCO.Ol)，見(jiàn)表2，不同精液制備方法精子自發(fā)AR率比較條形圖見(jiàn)圖5。 表2上游法與密度梯度離心處理后精子自發(fā)頂體反應(yīng)率比較 精液制備處理方法 + P值 上游法 雙層密度梯度離心 精子自發(fā) AR 率（％) 6,49±3.50 9.94±4.88 0.007****P<0.0110 00- I 8,00-f. I 1卩 6 00->73八^ 4 00-200-。00_1 1 , 1 1 1 1 *個(gè)袖液制各Jj fk圖5不同精液制備方法精子自發(fā)AR率比較10

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

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本文編號(hào)：2827585