研究背景及目的鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)是目前被廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)和日常消費品中的鄰苯二甲酸酯類化合物,是典型的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,人體可通過多種途徑和來源暴露于DEHP。大量研究顯示,DEHP具有潛在的發(fā)育毒性,包括胚胎發(fā)育毒性及神經(jīng)發(fā)育毒性。本研究主要探討孕期DEHP暴露是否能引起胎鼠宮內(nèi)生長受限,這種不良妊娠結(jié)局是否存在敏感期和性別差異以及不同孕期DEHP暴露對子代空間學習記憶能力的影響。方法本研究共分為以下三個部分:第一部分:ICR孕鼠隨機分為3組,分別為對照組(單純玉米油組)、50 mg/kg DEHP組、200 mg/kg DEHP組,按體重的1%于妊娠第0天(Gestational day 0,GD0)對孕鼠進行灌胃處理至GD17,每天記錄孕鼠的體重和飼料消耗量。于GD18上午剖殺孕鼠,記錄子宮連胎重、死胎數(shù)、活胎數(shù)以及吸收胎數(shù),稱量活胎體重和頭臀長,并通過肛殖距辨認胎鼠性別,若肛殖距不能確定胎鼠性別,可通過解剖觀察其內(nèi)生殖器來判斷。第二部分:ICR孕鼠隨機分為6組,處理組給予200 mg/kg DEHP灌胃處理,處理時間分別為孕早期(GD0-GD6)、孕中期(GD7-GD12)、孕晚期(GD13-GD17),并設(shè)置相應(yīng)的對照組,對照組給予玉米油灌胃處理,每天記錄孕鼠的體重和飼料消耗量。孕鼠于GD18上午剖殺,及時記錄子宮連胎重、胎盤重、胎盤直徑、胎鼠體重和頭臀長,并通過肛殖距辨認胎鼠性別,若肛殖距不能確定胎鼠性別,可通過解剖觀察其內(nèi)生殖器來判斷,同時也要記錄死胎數(shù)、活胎數(shù)以及吸收胎數(shù)等。對胎盤病理切片進行免疫組織化學檢測和HE染色,分別觀察Ki67陽性細胞的表達與分布情況及胎盤迷路層的血竇面積比。第三部分:ICR孕鼠隨機分為4組,處理組給予200 mg/kg DEHP灌胃處理,處理時間分別為孕中期(GD7-GD12)、孕晚期(GD13-GD17),設(shè)置相應(yīng)的對照組,給予玉米油灌胃處理。孕鼠分娩后,組內(nèi)調(diào)整每窩仔鼠只數(shù),10只/窩,雌雄各半。仔鼠在3周齡時斷乳并將雌雄仔鼠分開飼養(yǎng),每天監(jiān)測仔鼠的體重變化和進食情況。在仔鼠8周齡時(成年期)進行Morris水迷宮實驗,觀察成年期子代空間學習記憶能力的改變。結(jié)果在第一部分的研究中,對照組、50 mg/kg、200 mg/kg DEHP處理組總胎鼠體重分別為(1.376±0.018)g、(1.271±0.015)g和(1.173±0.026)g,與對照組相比,處理組胎鼠體重均降低,差異具有統(tǒng)計學意義(F=26.826,P0.01);雌性胎鼠體重分別為(1.341±0.020)g、(1.245±0.020)g和(1.108±0.030)g,與對照組相比,處理組胎鼠體重均降低,差異具有統(tǒng)計學意義(F=25.102,P0.01);雄性胎鼠體重分別為(1.410±0.016)g、(1.302±0.010)g和(1.220±0.02)g,與對照組相比,處理組胎鼠均體重降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);另外,處理組胎鼠的頭臀長與對照組相比也有顯著的降低。在第二部分的研究中,孕早期、孕中期、孕晚期暴露組及對應(yīng)的對照組胎鼠體重分別為(1.338±0.025)g、(1.312±0.025)g、(1.241±0.023)g和(1.401±0.015)g、(1.401±0.025)g、(1.402±0.025)g,與對照組相比,孕中、晚期胎鼠體重降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);孕早期、孕中期、孕晚期暴露組及對應(yīng)的對照組胎鼠頭臀長分別為(23.53±0.23)g、(23.27±0.20)g、(23.21±0.21)g和(24.41±0.23)g、(24.42±0.29)g、(24.41±0.22)g,與對照組相比,孕早、中、晚期胎鼠頭臀長降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。胎盤重量分別為(0.086±0.003)g、(0.083±0.004)g、(0.086±0.002)g和(0.098±0.005)g、(0.097±0.002)g、(0.097±0.003)g,與對照組相比,孕中期胎盤重量降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);另外,孕中期暴露組的胎盤迷路層血竇面積比及細胞增殖均較對照組降低,而對孕早、晚期暴露組的胎盤影響不明顯。在第三部分Morris水迷宮實驗中,與對照組相比,孕中期暴露組的成年雌性子代第一天和第三天的潛伏期明顯延長,第四天到第六天恢復(fù)正常;孕中期、孕晚期暴露組的成年雄性子代第三天的潛伏期明顯延長,第四天到第六天恢復(fù)正常;第7天孕晚期暴露組的雄性成年小鼠經(jīng)過目標象限的次數(shù)、平均運動距離縮短,潛伏期延長(P0.05)。結(jié)論孕期DEHP暴露可導(dǎo)致胎鼠宮內(nèi)生長受限,這種損傷在雌雄胎鼠中均有發(fā)生,不具有性別依賴性;胎鼠宮內(nèi)生長受限的敏感期主要在孕中期和孕晚期;孕晚期DEHP暴露可降低雄性子代的記憶能力。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R114;R715.3
【部分圖文】：

圖 1 Morris 水迷宮參考示意圖Fig 1 Morris water maze reference diagram學改變盤組織置于 4%多聚甲醛溶液中固定，并按照標準垂直于胎盤平面將胎盤蠟塊連續(xù)切成 5μm 的切片inandEosin，H&E）染色，中性樹脂封片，待樹脂。每組至少 5 張來源不同的切片，400× 光鏡下觀每張切片隨機選擇至少 10 個不連續(xù)的視野，用 N視野血竇面積比進行統(tǒng)計，其計算公式為：胎盤迷血竇像素總和/整個視野的總像素。

15P 暴露對孕鼠飼料消耗和孕期增重的影響。三組孕鼠從 GD0理（0、50、200mg/kg），每天稱量孕鼠飼料消耗量和孕鼠體體重；（C）孕鼠增重。所有資料均以平均值±標準誤的形式表HP exposure during pregnancy on consumption of food and weighonsumption. (B) Change of maternal body weight. (C) Maternal EHP 暴露對孕鼠妊娠結(jié)局的影響

圖 3 全孕期 DEHP 暴露對胎鼠體重和頭臀長的影響。三組孕鼠從 GD0 到 GD17 每天給予 DEHP灌胃處理（0、50、200 mg/kg），GD18 早上剖殺，辨認胎鼠性別及稱量體重。（A）總胎鼠體重；（B）雄性胎鼠體重；（C）雌性胎鼠體重；（D）總胎鼠頭臀長；（E）雄性胎鼠頭臀長；（F）雌性胎鼠頭臀長。所有資料均以平均值±標準誤的形式表示（ x ±SEM），N=12-17。Fig 3 Effects of maternal DEHP exposure throughout pregnancy on fetal weight and crown-rumplength. (A-C) Body weight of fetuses; (D-F) Crown-rump length was measured. (N = 12 17). *P <0.05.3.2 DEHP 暴露所致 IUGR 的時間窗3.2.1 不同孕期 DEHP 暴露對孕鼠飼料消耗和體重的影響與對照組相比，DEHP 處理組的孕鼠飼料消耗量均未發(fā)生明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見圖 4A；與對照組相比，DEHP 處理組孕鼠的孕期體重未

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本文編號：2825060