第一部分異氟烷暴露對(duì)成年雌鼠卵巢功能影響目的:探究異氟烷暴露對(duì)成年雌鼠卵巢功能的影響。方法:取50日齡C57成年雌鼠100只,隨機(jī)分配到Oppm,2500ppm、5000ppm、10000ppm以及20000ppm異氟烷暴露組,每組各20只。適應(yīng)結(jié)束后每日上午10時(shí),各組動(dòng)物分別按分組情況暴露于含Oppm,2500ppm、5000ppm、10000ppm以及20000ppm異氟烷的氣體環(huán)境中(1.5hrs/d),連續(xù)暴露15日。15日麻醉暴露完成后,確認(rèn)各只動(dòng)物動(dòng)情期別。各組取10只非動(dòng)情期雌鼠眼球取血,檢測(cè)血清基礎(chǔ)FSH、LH、E2及AMH水平,另取4只雌鼠CO2麻醉處死后做卵巢切片并計(jì)數(shù)卵泡。各組保留6只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自暴露結(jié)束次日開(kāi)始每日行陰道涂片,記錄動(dòng)情周期變化,連續(xù)記錄15天(約3個(gè)動(dòng)情周期)。結(jié)果:相比對(duì)照組(Oppm),10000ppm、20000ppm異氟烷連續(xù)15日暴露可引起成年雌鼠動(dòng)情周期顯著延長(zhǎng)。其中20000ppm異氟烷暴露組,成年雌鼠動(dòng)情期相比對(duì)照組顯著延長(zhǎng)。此外,5000ppm、10000ppm、20000ppm異氟烷暴露組雌鼠血清bFSH、bLH水平較對(duì)照組升高,同時(shí)AMH水平明顯下降。卵泡計(jì)數(shù)結(jié)果提示在高濃度異氟烷暴露可致閉鎖卵泡增加,發(fā)育卵泡減少,但各組間卵泡計(jì)數(shù)差異尚無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:較高濃度異氟烷暴露可破壞成年雌鼠正常排卵周期,影響血清激素分泌,破壞卵巢中正常發(fā)育卵泡,對(duì)雌鼠卵巢功能存在負(fù)性影響。第二部分異氟烷暴露影響卵巢功能的機(jī)制探討目的:探究異氟烷暴露對(duì)成年雌鼠卵巢功能負(fù)面影響的機(jī)制。方法:取60只C57成年雌鼠原代顆粒細(xì)胞均勻接種于20個(gè)6孔板中。隨機(jī)分為異氟烷暴露組和對(duì)照組,各組各10個(gè)6孔板。異氟烷暴露組采用2%異氟烷混合21%O2以及5%CO2暴露條件干預(yù),對(duì)照組同時(shí)暴露于不含麻醉氣體的同樣環(huán)境中。兩組各取3個(gè)6孔板干預(yù)3小時(shí)(為避免細(xì)胞凋亡)后記錄各組三磷酸腺苷(ATP)合成水平。各組余下6孔板按各自干預(yù)條件干預(yù)6小時(shí),記錄干預(yù)結(jié)束后各組顆粒細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平及bax/bcl2在轉(zhuǎn)錄水平、翻譯水平表達(dá)情況。結(jié)果:異氟烷干預(yù)組顆粒細(xì)胞,相比空白對(duì)照組顆粒細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高,凋亡相關(guān)分子bax/bcl2在轉(zhuǎn)錄水平、翻譯水平上調(diào),細(xì)胞ATP生成減少。結(jié)論:異氟烷暴露可能通過(guò)增加卵巢顆粒細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激,激活bax、bcl2線粒體凋亡通路,干擾線粒體能量生成,進(jìn)而促進(jìn)顆粒細(xì)胞凋亡,最終影響雌鼠卵巢功能。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R711.6

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本文編號(hào)：2814399