【摘要】：目的:通過檢測Nanog和STAT3在上皮性卵巢癌中的表達情況及相互作用,探討在HA、CD44信號途徑中,Nanog基因和STAT3的協(xié)同作用以及它們對卵巢惡性腫瘤細胞生命的影響,為卵巢惡性腫瘤的分子生物學靶點治療方案提供數(shù)據(jù)論點。方法:(1)結(jié)合逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應法檢測Nanog基因?qū)KOV3細胞中STAT3信使RNA表達的變化。向SKOV-3細胞孵育液中加入透明質(zhì)酸孵育1440分鐘;滴入抗CD44抗體孵育60分鐘,再加入透明質(zhì)酸繼續(xù)孵育1440分鐘;孵育液中加入Nanog小干擾RNA轉(zhuǎn)染試劑復合物孵育2880分鐘,再滴入透明質(zhì)酸繼續(xù)孵育1440分鐘;加入Nanog互補DNA轉(zhuǎn)染試劑復合物孵育2880分鐘,再滴入透明質(zhì)酸繼續(xù)孵育1440分鐘。應用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應法檢測STAT-3信使RNA占有量。(2)將SKOV-3細胞孵育液分為實驗組和對照組。結(jié)合卵白質(zhì)印跡法檢測SKOV3細胞中STAT3卵白的表達情況。SKOV-3細胞培養(yǎng)液中添加透明質(zhì)酸培養(yǎng)1440分鐘;滴入抗CD44抗體溫箱孵育60分鐘,滴入透明質(zhì)酸繼續(xù)孵育1440分鐘。驗證STAT-3卵白結(jié)合蛋白質(zhì)印跡法后的孵育能力。(3)CCK-8檢測Nanog轉(zhuǎn)染后SKOV-3細胞的生命存活量。SKOV-3細胞孵育液中添加透明質(zhì)酸孵育1440分鐘;滴入抗CD44抗體孵育60分鐘,再滴入透明質(zhì)酸繼續(xù)孵育1440分鐘;添加Nanog小干擾RNA轉(zhuǎn)染試劑復合物孵育2880分鐘后,再滴入透明質(zhì)酸繼續(xù)孵育1440分鐘。上述各組細胞孵育液中分別加入CCK-8試劑繼續(xù)孵育60分鐘后,用酶標儀測定波長450nm的吸光值(OD值)。結(jié)果:細胞核STAT-3蛋白在對照組、添加透明質(zhì)酸組、添加anti-CD44抗體后再添加透明質(zhì)酸組中的相對表達水平分別為:1.0945±0.0187、1.3233±0.0277、0.8519±0.0198,各組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。細胞中STAT-3信使RNA在對照組、添加透明質(zhì)酸組、添加anti-CD44抗體后再添加透明質(zhì)酸組、轉(zhuǎn)染Nanog小干擾RNA組、轉(zhuǎn)染Nanog互補DNA組中的相對表達水平分別為:2.0841±0.0391、3.6100±0.3208、1.2500±0.0800、1.8533±0.0833、6.9367±0.0961,各組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。SKOV-3細胞在對照組、添加透明質(zhì)酸組、添加anti-CD44抗體后再添加透明質(zhì)酸組、轉(zhuǎn)染Nanog小干擾RNA再添加透明質(zhì)酸組、轉(zhuǎn)染Nanog互補DNA再添加透明質(zhì)酸組中的吸光值分別為:0.584、0.847、0.380、0.464、1.145,各組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:在HA、CD44信號途徑中,Nanog基因在卵巢癌SKOV3細胞系中高表達,其與STAT3具有協(xié)同作用,共同加強卵巢癌細胞的增殖能力,促進卵巢癌細胞的生長。
【圖文】：

SKOV-3細胞（×10）

結(jié) 果育 2880 分鐘后可見熒光顯影證明轉(zhuǎn)染V3 細胞。-3 蛋白在 SKOV-3 細胞核中組、添加 HA 組、添加 anti-CD1.0945±0.0187、 1.3233±0.0277T-3 蛋白高于對照組，，約為對照加抗 CD44 抗體后添加 HA 細胞-3 蛋白約為添加抗 CD44 抗體后添加HA組細胞核STAT-3蛋白明 CD44 抗體組的 1.6 倍，差異有1 2 3
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.31

【參考文獻】

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本文編號：2710090