【摘要】：上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer, EOC)是婦科腫瘤中最常見的惡性腫瘤之一,卵巢癌細(xì)胞在腹腔內(nèi)的廣泛侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者預(yù)后差的重要原因。微環(huán)境中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor-associated macrophages, TAMs)在卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用越來越受到重視。巨噬細(xì)胞具有可塑性,不同的環(huán)境中,可以分化為不同的亞群(如M1、M2),不同亞群在分子表型及功能上存在顯著差異。TAMs表現(xiàn)為M2型,具有促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用。 表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)活化在腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中扮演重要角色。近來,巨噬細(xì)胞中EGF信號通路的作用也成為關(guān)注的熱點。為探討TAMs在上皮性卵巢癌進(jìn)展中的作用和活化TAMs中EGF/EGFR信號通路對上皮性卵巢癌惡性行為的影響及分子機(jī)制,本課題研究分為以下三個部分： 第一部分,分析TAMs的數(shù)量及比例與EOC患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。收集67例2007年1月至2008年12月期間在我院婦科腫瘤科診斷為EOC且腹水不少于200m1患者的臨床病理資料,采用免疫組織化學(xué)及流式細(xì)胞術(shù)方法分析原發(fā)卵巢癌組織及腹水中CD163+TAMs的數(shù)量及比例,統(tǒng)計分析上述指標(biāo)與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示：癌組織中CD163+TAMs的數(shù)量與組織分化程度、FIGO (International Federation of Gynaecology and Obstetrics)分期及患者對鉑類治療的反應(yīng)密切相關(guān)；腹水中,TAMs的比例與FIGO分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、腹水量、患者對化療及鉑類治療的反應(yīng)密切相關(guān)；并且癌組織中TAMs數(shù)量是患者無疾病進(jìn)展生存期及總生存期的獨立預(yù)后因素。 第二部分,分析EGF在外周血單核細(xì)胞向TAMs分化中的作用。分離培養(yǎng)健康志愿者外周血單核細(xì)胞(Peripheral blood monocytes, MOs)及EOC患者腹水中TAMs,比較EGF處理后的MOs與TAMs分子表型和分泌細(xì)胞因子的差異,Transwell侵襲實驗、MTT增殖實驗及單層傷口愈合實驗(Wound healing assay)檢測不同處理后的條件培養(yǎng)基對卵巢癌細(xì)胞SKOV3侵襲、增殖及遷移能力的影響。結(jié)果表明：EGF在體外可誘導(dǎo)外周血來源單核細(xì)胞分化為M2型巨噬細(xì)胞樣TAMs,其分子表型和分泌型表現(xiàn)為CD163highIL-10highTGF-βhighIL-8high。 EGF刺激MOs后收取的條件培養(yǎng)上清可促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的侵襲、增殖及遷移。 第三部分,TAMs中EGFR活化促進(jìn)EOC惡性行為的機(jī)制研究。利用EGFR的單克隆抗體西妥昔單抗(Cetuximab), PI3K抑制劑LY294002和ERK抑制劑PD98095檢測不同處理后TAMs分泌IL-10的變化。其次,通過Transwell侵襲實驗、MTT增殖實驗及單層傷口愈合實驗檢測抑制TAMs培養(yǎng)上清中IL-10作用的條件培養(yǎng)基對卵巢癌細(xì)胞SKOV3侵襲、增殖及遷移能力的影響。結(jié)果顯示：24h時,EGF (0.00μg/ml-1.0μg/ml)刺激TAMs分泌IL-10存在濃度依賴。在TAMs中,EGF與其受體EGFR結(jié)合后可能通過其下游PI3K/AKT和ERK兩條信號通路促進(jìn)IL-10的分泌。并且,含有IL-10的TAMs培養(yǎng)上清液可能通過上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達(dá)水平促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的侵襲、增殖和遷移。 綜上所述,得出以下結(jié)論： (1)原發(fā)EOC癌組織及腹水中CD163+TAMs的數(shù)量及比例與EOC的惡性程度密切相關(guān),表達(dá)越高,提示患者的疾病惡性程度越高。 (2)EGF在體外可誘導(dǎo)外周血來源單核細(xì)胞分化為具有M2型巨噬細(xì)胞特征(CD163highIL-10highTGF-βhighIL-8high的TAMs,并且EGF刺激MOs后收取的條件培養(yǎng)上清可促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的侵襲、增殖及遷移。 (3)EGF與其受體EGFR結(jié)合后可能通過其下游PI3K/AKT和ERK兩條信號通路促進(jìn)TAMs分泌IL-10,而且IL-10可能通過上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中VEGF和MMP-9的表達(dá)水平促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲、增殖和遷移。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2451703