【摘要】：卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)是原發(fā)性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)發(fā)展的終末階段,此時原始卵泡池處于耗竭狀態(tài),并且此種耗竭狀態(tài)是不可逆的,臨床上表現(xiàn)為閉經(jīng)、不孕以及骨質(zhì)疏松、潮熱多汗等絕經(jīng)期癥狀。POF在臨床上并不少見,有調(diào)查表明30歲以內(nèi)女性POF的發(fā)病率約為千分之一,40歲以內(nèi)的發(fā)病率約為百分之一。POF的相關(guān)病因多且復(fù)雜,目前的研究表明,遺傳因素、免疫因素、代謝因素、醫(yī)源性損傷、病毒感染和其他環(huán)境因素等都可能導(dǎo)致卵巢早衰的發(fā)生。但是,截至目前為止,卵巢早衰的確切的發(fā)病機制尚未完全闡明。目前發(fā)現(xiàn)多個可能與POF發(fā)病有關(guān)的基因都與凋亡過程相關(guān)。例如MLH3基因突變導(dǎo)致減數(shù)分裂不能正常進行,使異常卵母細胞出現(xiàn)了快速凋亡;PGRMC1基因錯義突變會損傷卵巢發(fā)育中孕酮的抗凋亡作用,使得卵泡的過早丟失,最終導(dǎo)致POF。根據(jù)電泳的方法發(fā)現(xiàn)細胞游離DNA(cell-free DNA,cfDNA)與凋亡細胞形成的條帶相一致,并且T淋巴細胞等活性細胞DNA的主動釋放也會形成相似的條帶。由此表明,cfDNA可能主要來源于細胞凋亡和活性細胞新合成DNA的主動釋放。因此,我們以cfDNA為切入點探究細胞凋亡是否影響POF的發(fā)病。除此之外,DNA甲基化是生物體內(nèi)一種不可或缺的多種酶參與的表觀遺傳學(xué)調(diào)控方式。高等的真核生物可以通過DNA甲基化狀態(tài)的改變來調(diào)控基因是否表達以及表達的程度。研究表明,多種疾病中普遍存在DNA的異常甲基化的現(xiàn)象,尤其是在腫瘤中,這可能是腫瘤的發(fā)病中最早出現(xiàn)的改變。cfDNA作為不同于細胞內(nèi)DNA的遺傳物質(zhì),有其特有的來源與生物學(xué)特性。其中cfDNA甲基化特性可能成為較多相關(guān)疾病的診斷靶標�，F(xiàn)有的多項研究表明,在多種疾病中cfDNA相關(guān)基因的甲基化狀態(tài)發(fā)生改變,并且已經(jīng)開始探討將其作為特異性診斷指標應(yīng)用于臨床實踐的可能性。故從cfDNA特異基因甲基化角度來探究POF發(fā)病機制,對卵巢早衰的早診斷、早治療以及預(yù)后判斷有重大的意義。目的通過探究POF患者血漿中cfDNA的含量及完整性的特征以及cfDNA的甲基化的特點,為POF發(fā)病機制的研究提供新的角度。方法本研究的研究對象為本中心被診斷為卵巢早衰(POF)的患者,研究樣品為患者的血漿細胞游離DNA,以卵巢功能正常的女性為對照。采用實時熒光定量PCR(Real time-qPCR,RT-qPCR)絕對定量法檢測細胞游離DNA的含量,通過計算不同片段長度細胞游離DNA的比例得到細胞游離DNA的完整性指數(shù)。采用甲基化芯片技術(shù)檢測血漿cfDNA的甲基化狀態(tài),再用GO分析法探索差異甲基化位點對應(yīng)基因的聚類信息。結(jié)果通過Real time-qPCR的方法,用引物ALU115進行Real-time PCR得到的CT值所計算的到的cfDNA濃度,代表血漿中全部的cfDNA含量,引物ALU247進行Real time-qPCR得到的CT值所計算的到的cfDNA濃度,則代表血漿中較大片段的cfDNA含量。通過統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn),POF組的血漿cfDNA濃度高于對照組(9.76ng/μl vs.3.73ng/μl,p0.001),POF組的血漿cfDNA完整性低于對照組(8.35%vs.22.41%,p0.001)。POF組和對照組患者的血清cfDNA經(jīng)過重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化后,用BeadChip Array Inf Methyl 8 Sample Beadchip甲基化芯片對其進行甲基化分析,發(fā)現(xiàn)有127724個位點的甲基化水平存在顯著差異。POF組和對照組中差異甲基化位點分布在CpG高密度區(qū)和CpG中密度區(qū)比例分別為39.52%和43.68%。對基因組功能區(qū)分析發(fā)現(xiàn),啟動子區(qū)(TSS1500、TSS200及1st Exon)的差異甲基化位點占36.66%。用DAVID網(wǎng)站對POF組和對照組中差異甲基化位點對應(yīng)的基因進行GO分析,包括細胞組分、分子功能和生物過程。差異甲基化位點所在基因主要定位于細胞質(zhì)、質(zhì)膜、胞質(zhì)溶膠、胞質(zhì)外體等細胞組分;具有蛋白結(jié)合、ATP結(jié)合和RNA結(jié)合和GTPase激活劑活性等分子功能;參與正向調(diào)節(jié)GTPase活性、蛋白磷酸化、細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及正向調(diào)節(jié)凋亡等生物過程。利用KEGG分析差異甲基化位點所在基因參與的信號通路。結(jié)果顯示,POF組和對照組相比,差異甲基化位點所在基因主要參與MAPK信號通路、內(nèi)吞作用以及雌激素信號通路、孕激素介導(dǎo)的卵母細胞成熟及GnRH信號通路等。結(jié)論1.卵巢早衰患者血漿中cfDNA的含量增加,而完整性降低,可能是由于細胞凋亡增加所導(dǎo)致的。2.卵巢早衰患者血漿中cfDNA的差異甲基化位點富集于對細胞凋亡起調(diào)控作用的KEGG通路,以及雌激素信號通路、孕激素介導(dǎo)的卵母細胞成熟及GnRH信號通路等與卵泡發(fā)育密切相關(guān)的信號通路。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R711.75

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 尚世強,俞錫林,洪文瀾,俞惠民,孫眉月;DETECTION OF BACTERIAL DNA BY PCR AND REVERSE HYBRIDIZATION IN THE 16s rRNA GENE[J];Journal of Zhejiang University Science;2000年02期

2 MA Wen li;DNA Diagnosis and Gene Therapy:Advances and Prospects in the 21st Century[J];深圳大學(xué)學(xué)報;2000年04期

3 葛學(xué)銘,陸應(yīng)麟,付生法,范文紅,劉爽;A NOVEL HUMAN DNA SEQUENCE WITH TUMOR METASTASIS SUPPRESSIVE ACTIVITY[J];Chinese Journal of Cancer Research;2000年02期

4 曹暉,劉玉萍,小松かつ子,畢培曦,邵鵬柱;DNA Molecular Profiling:A New Approach to Quality Control of Chinese Drugs[J];Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine;2000年01期

5 ;DNA REPAIR CAPACITY IN LUNG CANCER PATIENTS[J];癌變.畸變.突變;2001年04期

6 黃力拉,朱剛勁;被拐賣及失蹤兒童采血驗DNA前的心理問題及對策[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年03期

7 安小惠 ,王一理 ,來寶長 ,耿一萍 ,司履生;CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT'S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J];Journal of Xi'an Medical University;2001年02期

8 ;A Study of PCR with DNA Extracted from Single Cell Isolated from Histological Sections[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年01期

9 王軍陽,范桂香,勝利,袁育康;THE CONSTRUCTION AND PRELIMINARY APPRAISEMENT OF HSV-2 gD GENE DNA VACCINE[J];Academic Journal of Xi'an Jiaotong University;2002年02期

10 董菁 ,成軍 ,王勤環(huán) ,施雙雙 ,王剛 ,斯崇文;CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 Michael J.Siefkes;Cory O.Brant;Ronald B.Walter;;A novel real-time XL-PCR for DNA damage detection[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

2 ;Hormonal Regulation and Tumorigenic Role of DNA Methyltransferase[A];2011中國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議暨浙江省計劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨生殖健康講習(xí)班論文匯編[C];2011年

3 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

4 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點致動下的DNA雜交行為[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2008年

5 白明慧;翁小成;周翔;;聯(lián)鄰苯二酚類小分子作為DNA交聯(lián)劑的研究[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

6 張曄;杜智;楊斌;高英堂;;檢測外周血中游離DNA的應(yīng)用前景(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2009年

7 周紅;鄭江;王良喜;丁國富;魯永玲;潘文東;羅平;肖光夏;;CpG DNA誘導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)綜合征的作用及其機制研究[A];全國燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會論文匯編[C];2004年

8 ;EFFECTS OF Ku70-DEFICIENT ON ARSENITE-INDUCED DNA DOUBLE STRAND BREAKS, CHROMOSOMAL ALTERATIONS AND CELL CYCLE ARREST[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會論文摘要[C];2005年

9 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結(jié)合方式中的DNA媒介電荷轉(zhuǎn)移[A];第十三次全國電化學(xué)會議論文摘要集（下集）[C];2005年

10 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學(xué)化工學(xué)會2006年年會暨循環(huán)經(jīng)濟專家論壇論文集[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 本報記者 袁滿;平安：把“領(lǐng)先”作為DNA[N];經(jīng)濟觀察報;2006年

2 舒放;編織一個DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

3 閆潔;英兩無罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年

4 何德功;日本制成診斷魚病的“DNA書”[N];農(nóng)民日報;2004年

5 本報記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日報;2009年

6 周斌偉　鄒巍;蘇州警方應(yīng)用DNA技術(shù)一年偵破案件1887起[N];人民公安報;2011年

7 本報記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日報;2011年

8 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報;2011年

9 常麗君;DNA電路可檢測導(dǎo)致疾病的基因損傷[N];科技日報;2012年

10 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日報;2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐陽;基于質(zhì)譜技術(shù)的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學(xué);2014年

2 池晴佳;DNA動力學(xué)與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學(xué);2015年

3 胡璐璐;哺乳動物DNA去甲基化過程關(guān)鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴增的DNA自組裝技術(shù)的研究[D];南京大學(xué);2014年

5 黃學(xué)鋒;精子DNA碎片的臨床意義：臨床和實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 隋江東;APE1促進DNA-PKcs介導(dǎo)hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復(fù)制及細胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學(xué);2015年

8 王璐;哺乳動物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

9 齊文靖;染色質(zhì)改構(gòu)蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復(fù)中的作用及機制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運動學(xué)建模及誤差實時校正方法[D];沈陽理工大學(xué);2014年

2 聞金燕;水溶性羧基和吡啶基咔咯大環(huán)與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

3 江懌雨;水溶性羧酸卟啉及其配合物與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

4 高志森;比較外周游離循環(huán)腫瘤DNA與癌胚抗原監(jiān)測非小細胞肺癌根治術(shù)前后腫瘤負荷變化的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 丁浩;血漿循環(huán)DNA完整性及多基因甲基化對肺癌診斷價值的研究[D];河北大學(xué);2015年

6 王鵬;基于碳點@氧化石墨烯復(fù)合材料DNA生物傳感器的構(gòu)建及用于PML/RARα基因檢測[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李海青;轉(zhuǎn)堿篷和鹽角草總DNA的耐鹽紫花苜蓿的選育[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

8 李婷婷;小鼠DNA模式識別重要受體的分子結(jié)構(gòu)特征及其功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

9 劉瑞斯;抗癌藥物奧沙利鉑與DNA相互作用的原子力顯微鏡觀察研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

10 熊忠;芳香二肽與一價金屬離子間相互作用及DNA切割活性的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

，

本文編號：2377567