【摘要】：背景:放射性~(131)I治療是臨床上用于甲亢及分化型甲狀腺癌治療的常規(guī)方法,但游離~(131)I在非甲狀腺細(xì)胞內(nèi)幾乎沒有攝取,目前利用納米載體的靶向性和緩釋性的特點,解決了既往研究中對非甲狀腺腫瘤細(xì)胞進(jìn)行放射性碘治療靶向差和細(xì)胞內(nèi)存留時間短的問題。既往研究也發(fā)現(xiàn)使用直接標(biāo)記法構(gòu)建的核素納米載體,由于單位質(zhì)量納米載體可攜帶的~(131)I量有限,故在動物實驗中治療效果欠佳。擬使用~(131)I標(biāo)記隨機(jī)酪氨酸多肽鏈并包裹于納米脂質(zhì)體的方法制備新型多功能核素納米脂質(zhì)體,以提高單位納米脂質(zhì)體攜帶~(131)I量,并在宮頸癌He La細(xì)胞及裸鼠模型中進(jìn)行實驗研究。目的:比較納米脂質(zhì)體包裹~(131)I標(biāo)記酪氨酸多肽鏈與~(131)I直接標(biāo)記納米脂質(zhì)體兩種的方法的不同,及各自在宮頸癌體內(nèi)、外實驗中的差異。為放射性核素納米脂質(zhì)體的制備提供開闊新視野,并期望可以為宮頸癌的治療提供一種新方法。方法:第一部分為核素納米脂質(zhì)體的構(gòu)建及采用紙層析法分析單位納米脂質(zhì)體的最大標(biāo)記量、標(biāo)記率及放化純。第二部分為核素納米脂質(zhì)體細(xì)胞水平研究:1)通過共聚焦顯微鏡顯像結(jié)果分析納米脂質(zhì)體在He La細(xì)胞系的靶向性結(jié)合和攝取能力;2)初步評估核素納米脂質(zhì)體在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的存留時間及He La細(xì)胞對于~(131)I的攝取量;3)利用MTS法分析核素納米脂質(zhì)體的半抑制劑量(IC_(50)值);并在此基礎(chǔ)上利用流式細(xì)胞儀觀察核素納米脂質(zhì)體對He La細(xì)胞的凋亡效果。第三部分為核素納米脂質(zhì)體動物水平實驗,1)采用3-4周齡雌性裸鼠構(gòu)建宮頸癌種植瘤模型;2)利用γ計數(shù)儀測定核素納米脂質(zhì)體在裸鼠體內(nèi)組織分布情況;3)運用SPECT/CT斷層顯像進(jìn)行核素納米脂質(zhì)體RGD-~(131)I-TPC-L、~(131)I-RGD-L及Na~(131)I在裸鼠種植瘤內(nèi)的定位并初步觀察其在體內(nèi)的存留時間;4)將裸鼠分為RGD-~(131)I-TPC-L組、~(131)I-RGD-L組、Na~(131)I組及生理鹽水組,研究各治療組對裸鼠種植瘤的治療效果等。結(jié)果:成功制備兩種核素納米脂質(zhì)體分別為RGD-~(131)I-TPC-L(納米脂質(zhì)體包裹~(131)I標(biāo)記的酪氨酸多肽鏈)和~(131)I-RGD-L(~(131)I直接標(biāo)記納米脂質(zhì)體),兩種核素納米脂質(zhì)體單位納米脂質(zhì)體的最大標(biāo)記量、標(biāo)記率分別為(6.3±0.8m Ci VS2.7±0.6m Ci),(85.3±7.4%VS 72.5±9.8%)(P0.05)。在細(xì)胞水平實驗中,共聚焦顯微鏡實驗表明He La細(xì)胞可以明顯攝取納米脂質(zhì)體,通過γ計數(shù)儀顯像結(jié)果顯示加入核素納米脂質(zhì)體后6h時攝碘量達(dá)到高峰,RGD-~(131)I-TPC-L組的最高攝碘量高于~(131)I-RGD-L組,但在同等放射性劑量的前提下,兩組核素納米脂質(zhì)體攝碘量未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異。采用ESACalc分析得出兩種核素納米脂質(zhì)體RGD-~(131)I-TPC-L和~(131)I-RGD-L的IC_(50)值分別為43.6μCi VS 50.3μCi。在同等劑量(50μCi ~(131)I)的前提下,Na~(131)I組、RGD-~(131)I-TPC-L組和~(131)I-RGD-L組對Hela細(xì)胞的晚期凋亡率分別為5.1±0.39%、10.3±0.67%和11.9±0.40%(P0.05)。在動物水平實驗中,成功構(gòu)建宮頸癌裸鼠模型,宮頸癌裸鼠種植瘤內(nèi)注射藥物24h、48h、72h后,腫瘤組織對游離Na~(131)I組、RGD-~(131)I-TPC-L組和~(131)I-RGD-L組的攝取分別為(0.41±0.12%ID/g,0.31±0.08%ID/g,0.29±0.10%ID/g)VS(25.71±5.13%ID/g,17.47±3.43%ID/g,8.75±2.64%ID/g)VS(19.73±4.66%ID/g,9.92±2.11%ID/g,3.60±1.03%ID/g),(P0.05);SPECT/CT斷層顯像顯示核素納米脂質(zhì)體在腫瘤內(nèi)可見明顯清晰顯像且存留時間較長,Na~(131)I在裸鼠腫瘤內(nèi)顯影淺淡且清除較快。病理切片HE染色顯示各組裸鼠心、肝、脾、腎等主要器官未見明顯組織破壞,RGD-~(131)I-TPC-L及~(131)I-RGD-L組腫瘤組織鏡下可見大片腫瘤細(xì)胞變性壞死。在治療療效方面,通過比較腫瘤體積相對增殖率可明確兩組核素納米脂質(zhì)體均對宮頸癌裸鼠模型具有陽性治療效果,而Na ~(131)I組無明顯治療效果。RGD-~(131)I-TPC-L組核素納米脂質(zhì)體比~(131)I-RGD-L組具有更高的抑瘤率,更低的腫瘤體積相對增殖率,表明RGD-~(131)I-TPC-~(131)I核素納米脂質(zhì)體對于宮頸癌具有較好的治療效果。結(jié)論:與~(131)I-RGD-L相比,RGD-~(131)I-TPC-L核素納米脂質(zhì)體具有更高的最大標(biāo)記量及標(biāo)記率,因此納米脂質(zhì)體包裹~(131)I標(biāo)記酪氨酸多肽鏈比~(131)I直接標(biāo)記在納米脂質(zhì)體表面的方法具有更好的標(biāo)記效果,可以成為以后構(gòu)建核素納米脂質(zhì)體的方法。RGD-~(131)I-TPC-L核素納米脂質(zhì)體在宮頸癌細(xì)胞及裸鼠模型中具有較好的抑制腫瘤生長的作用,可以為宮頸癌治療提供新思路。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2377482