孕期限食對(duì)子代小鼠生長(zhǎng)代謝及卵母細(xì)胞DNA甲基化水平的影響
本文選題:孕期限食 + DNA甲基化 ; 參考:《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文
【摘要】:背景:隨著“減肥熱”的流行,孕婦在妊娠期間控制飲食的現(xiàn)象也開始出現(xiàn),因此,宮內(nèi)營養(yǎng)不良不再局限于物質(zhì)匱乏地區(qū)的孕婦中,也出現(xiàn)在妊娠期限制飲食的孕婦中。宮內(nèi)營養(yǎng)不良不僅會(huì)直接導(dǎo)致胎兒在子宮內(nèi)的發(fā)育和生長(zhǎng)受到限制,也會(huì)增加子代在成年后患代謝性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。“表觀遺傳學(xué)”是指在DNA序列沒有發(fā)生任何改變的情況下,環(huán)境變化與個(gè)體表型改變之間的關(guān)系。這一概念的提出為宮內(nèi)不良環(huán)境對(duì)子代產(chǎn)生影響的機(jī)制提供了合理的解釋。越來越多的研究結(jié)果都表明,表觀遺傳學(xué)修飾可穩(wěn)定遺傳給后代。而親本代系間遺傳的唯一途徑就是通過生殖細(xì)胞。孕期不僅是胚胎發(fā)育的重要時(shí)期,也是原始生殖細(xì)胞(primordial germ cells,PGCs)開始形成并分化成為生殖細(xì)胞的重要時(shí)期,同時(shí)伴隨著細(xì)胞內(nèi)DNA甲基化大規(guī)模地擦除與重建。DNA甲基化的發(fā)生和去除需要DNA甲基轉(zhuǎn)移酶、活性甲基、去甲基化酶的參與。環(huán)境不利因素有可能影響機(jī)體內(nèi)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶、去甲基化酶的活性或者活性甲基的數(shù)量而干擾DNA甲基化的正常發(fā)生與去除。在胚胎期,發(fā)生DNA甲基化水平變化的基因包括調(diào)控胚胎在子宮內(nèi)發(fā)育的印記基因和調(diào)控糖脂代謝的代謝基因。目的:為探究孕期宮內(nèi)營養(yǎng)不良對(duì)子代的影響及相關(guān)機(jī)制,我們建立了孕期限食的小鼠模型,通過觀測(cè)子代小鼠生長(zhǎng)代謝的相關(guān)指標(biāo)及卵母細(xì)胞內(nèi)印記基因、代謝基因甲基化水平來探究孕期營養(yǎng)不良對(duì)子代的影響及其表觀遺傳學(xué)機(jī)制。方法:正常見栓的孕鼠自E0.5至E12.5監(jiān)測(cè)每日消耗食物量,E12.5天,隨機(jī)將孕鼠分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組孕鼠給予日常消耗食量的一半食物量至分娩日,對(duì)照組孕鼠自由攝食。兩組孕鼠分娩后均在給予正常食物量。觀測(cè)子代小鼠的出生數(shù)量、體重、性別比,同時(shí)監(jiān)測(cè)子代小鼠在不同生長(zhǎng)時(shí)期的體重。待子代小鼠性成熟后,行葡糖糖耐量實(shí)驗(yàn)(GTT)、胰島素耐量實(shí)驗(yàn)(ITT)檢測(cè)子代小鼠的葡萄糖及胰島素代謝情況。最后,取子代雌鼠的卵母細(xì)胞,經(jīng)重亞硫酸鹽處理后檢測(cè)印記基因H19、IGF2r、瘦素基因(Leptin,lep)及脂聯(lián)素基因(adiponectin,adip)的甲基化水平。結(jié)果:(1)與對(duì)照組的孕鼠相比,限食孕鼠越接近分娩日狀態(tài)越差,活動(dòng)量極少,個(gè)別狀態(tài)極差的孕鼠在分娩前死亡。妊娠第19天左右,限食孕鼠與對(duì)照孕鼠相比體型偏小,早產(chǎn)發(fā)生率明顯增加(P0.05)。(2)兩組孕鼠所分娩的子代小鼠數(shù)量及雄鼠所占比例相當(dāng),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。但是限食孕鼠的子代整體出生體重偏低,與對(duì)照組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)限食孕鼠的子代在3周齡時(shí)體重仍然低于對(duì)照組子代小鼠的體重,但在6周齡時(shí)卻趕超對(duì)照組子代小鼠的體重,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6-8周齡時(shí)期,對(duì)照組子代小鼠的體重增長(zhǎng)進(jìn)入平臺(tái)期,增長(zhǎng)緩慢。但是限食孕鼠的子代小鼠的體重值仍在迅速增加,并在8周齡時(shí)明顯高于對(duì)照組子代小鼠,兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。根據(jù)子代小鼠雌雄性別的不同分別繪制生長(zhǎng)曲線,結(jié)果顯示與對(duì)照組子代小鼠相比,限食孕鼠的子代雄鼠超重或肥胖,而雌鼠體重偏低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)子代小鼠性成熟后,GTT、ITT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組子代小鼠的血糖曲線趨勢(shì)一致,各時(shí)間點(diǎn)血糖值的差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)重亞硫酸鹽處理結(jié)合限制性內(nèi)切酶反應(yīng)結(jié)果顯示,限食孕鼠的子代卵母細(xì)胞內(nèi)印記基因H19、IGF2r的甲基化水平與對(duì)照組一致,未見異常。對(duì)照組子代小鼠卵母細(xì)胞中Leptin的甲基化水平為1.76%,限食孕鼠的子代小鼠卵母細(xì)胞中Leptin的甲基化水平為1.18%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。adiponectin基因在限食孕鼠的子代小鼠和對(duì)照組子代小鼠的卵母細(xì)胞內(nèi)甲基化比例分別是32.5%和35.0%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(6)子二代F2-UC和F2-CU在產(chǎn)仔數(shù)量及雄性小鼠所占比例上與對(duì)照組小鼠無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。F2-UC出生體重偏低,但是差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);F2-CU的出生體重則明顯高于對(duì)照組子代小鼠的出生體重(P0.05)。結(jié)論:孕期限食明顯增加早產(chǎn)率,并且造成子代低出生體重。子代雄鼠在性成熟后有明顯的肥胖趨勢(shì),而雌鼠體重值偏低。子代小鼠尚未表現(xiàn)出明顯的葡萄糖及胰島素代謝異常。盡管限食子代的卵母細(xì)胞印記基因H19、IGF2r及代謝基因Leptin、adiponectin的甲基化水平未發(fā)現(xiàn)異常,但子二代的出生體重異常,可能存在其他機(jī)制經(jīng)卵母細(xì)胞跨代遺傳從而影響了子二代胚胎的發(fā)育。
[Abstract]:Background : With the popularity of " weight reducing fever " , the phenomenon that pregnant women control diet during pregnancy has also begun to occur , so that intrauterine malnutrition is no longer confined to pregnant women in the deficient area , but also occurs in pregnant women with limited diet during pregnancy . There was no significant difference between the two groups ( P0.05 ) . The results showed that the weight of the offspring of the pregnant mice was lower than that of the control group , but the difference was not statistically significant ( P0.05 ) . ( 6 ) There was no statistical difference between F2 - UC and F2 - CU in litter size and male mice . F2 - UC was low in body weight , but there was no significant difference in F2 - CU birth weight ( P0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】:鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號(hào)】:R714
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本文編號(hào):1840396
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