目的:探討靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時(shí),兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)記率及USPIO對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖性及多向分化能力的影響,并利用MRI活體示蹤USPIO標(biāo)記兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的進(jìn)程及信號(hào)強(qiáng)度,為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的USPIO靜脈注射濃度的設(shè)置提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:(1)將6只新西蘭白兔完全隨機(jī)分為2組,每組3只,以組為單位,實(shí)驗(yàn)組經(jīng)耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO,對(duì)照組不做任何處理,48h后處死各組兔,分離、培養(yǎng)兔BMSCs至第三代作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象;(2)普魯士藍(lán)染色測(cè)量各組兔BMSCs的磁標(biāo)記率,增強(qiáng)型cck-8試劑盒觀察BMSCs增殖性強(qiáng)弱,并對(duì)各組兔BMSCs進(jìn)行多向誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn),觀察成骨、成脂、成軟骨能力的變化;(3)將36只新西蘭白兔完全隨機(jī)分為4組,每組9只,制備兔雙膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型,實(shí)驗(yàn)組注入U(xiǎn)SPIO標(biāo)記兔BMSCs-海藻酸鈉凝膠復(fù)合體,陽性對(duì)照組注入未標(biāo)記兔BMSCs-海藻酸鈉凝膠復(fù)合體,陰性對(duì)照組注入純海藻酸鈉凝膠,空白組不做任何處理,分別于術(shù)后1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月進(jìn)行大體觀察和MRI掃描,并進(jìn)行組織學(xué)研究。(4)收集數(shù)據(jù),并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:(1)經(jīng)兔耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO后提取、培養(yǎng)獲得的兔BMSCs與對(duì)照組兔BMSCs相比,細(xì)胞形態(tài)基本相同;(2)普魯士藍(lán)染色顯示經(jīng)USPIO標(biāo)記的兔BMSCs胞質(zhì)內(nèi)可見大量藍(lán)染顆粒,表明USPIO已被兔BMSCs吞噬;利用增強(qiáng)型CCK-8試劑盒反應(yīng),通過自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)得吸光度值繪制增殖曲線顯示,濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的增殖活性;經(jīng)多向誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)后顯示,濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的多向分化能力;(3)BMSCs移植治療兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損顯示,隨著時(shí)間的遞增,標(biāo)記細(xì)胞移植組與未標(biāo)記細(xì)胞移植組的軟骨缺損逐漸被修復(fù),純海藻酸鈉移植組與空白組的軟骨缺損修復(fù)緩慢。(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示,BMSCs移植治療兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損后,同時(shí)期標(biāo)記細(xì)胞移植組與未標(biāo)記細(xì)胞移植組的修復(fù)效果未見明顯差異(P0.05),與純海藻酸鈉移植組、空白組修復(fù)效果相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);同時(shí)期標(biāo)記細(xì)胞移植組與未標(biāo)記細(xì)胞移植組的軟骨缺損處的SI未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:(1)當(dāng)靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時(shí),兔BMSCs可被USPIO標(biāo)記;(2)該注射濃度不會(huì)影響兔BMSCs的生理活性;(3)當(dāng)靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時(shí),被標(biāo)記的兔BMSCs可用于移植治療兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損,但未能明顯被MRI示蹤。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R445.2;R684
【部分圖文】：

圖 2-8 40x代細(xì)胞培養(yǎng)一周左右的生長(zhǎng)情況（40x），見大細(xì)胞培養(yǎng)后見細(xì)胞融合度達(dá) 80%以上時(shí)，細(xì)胞呈圓形、漂浮狀，傳代后細(xì)胞貼壁并到 80%以上后，繼續(xù)進(jìn)行傳代。傳代完成后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的純度增加。

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文.3 USPIO 對(duì) BMSCs 多向分化能力的影響Ⅰ.成骨分化能力的測(cè)定: BMSCs 經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化 3 周后，顯微鏡下可見細(xì)狀生長(zhǎng)，細(xì)胞集落形成，細(xì)胞基質(zhì)中可見大量的鈣鹽沉積，經(jīng)茜素紅染色后胞質(zhì)內(nèi)的紅色鈣結(jié)節(jié)，證明 BMSCs 的成骨能力未受 USPIO 影響。

胞質(zhì)內(nèi)的紅色鈣結(jié)節(jié)，證明 BMSCs 的成骨能力未受 USPIO 影響。圖 2-14 40x 圖 2-15 100x如圖 2-14、2-15 所示為 P3 USPIO 標(biāo)記 BMSCs 經(jīng)成骨誘導(dǎo)后茜素紅染色結(jié)果。Ⅱ.成脂分化能力的測(cè)定：成脂誘導(dǎo)分化 20 天左右，顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞誘導(dǎo)前明顯增大，大量的脂肪滴存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，經(jīng)油紅 O 染色后顯示為證明 BMSCs 的成脂能力未受 USPIO 影響。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2888913