發(fā)布時(shí)間：2020-06-13 01:37

【摘要】：目的 繼組織器官移植后，干細(xì)胞移植具有可以治療許多長(zhǎng)期以來(lái)令人類束手無(wú)策的頑癥的前景，而引起越來(lái)越多的關(guān)注。隨著研究的深入和進(jìn)入臨床應(yīng)用的可能性出現(xiàn)，在體追蹤移植干細(xì)胞的難題成為需要迫切解決的問(wèn)題。對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，隨時(shí)取材活檢甚至殺死動(dòng)物獲得樣本，以觀察細(xì)胞移植是否成功、增殖狀態(tài)、遷移和分化情況。在人體，獲得上述信息必須通過(guò)非創(chuàng)傷性途徑�；诜派湫允聚櫾淼暮怂仫@像技術(shù)，反映的是細(xì)胞內(nèi)源性分子表達(dá)，特異性強(qiáng)，應(yīng)用干細(xì)胞或其不同分化階段的不同標(biāo)志分子作為顯像靶分子，不但可以追蹤干細(xì)胞的存活和增殖還能監(jiān)測(cè)其分化，因而是干細(xì)胞活體示蹤最具希望的工具之一。移植細(xì)胞數(shù)量與受移植組織器官細(xì)胞相比微乎其微，核素顯像能否達(dá)到探測(cè)到如此微小數(shù)量細(xì)胞表達(dá)的特征分子，是必須首要解決的問(wèn)題。本文采用干細(xì)胞或前體細(xì)胞的兩種相對(duì)特異的分子標(biāo)志物作為顯像靶分子，探索核素顯像活體追蹤移植干細(xì)胞的可行性。 標(biāo)志物一：轉(zhuǎn)鐵蛋白受體 方法 從人胎兒血分離培養(yǎng)人間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs)，移植于兔脊髓；流式細(xì)胞學(xué)、細(xì)胞和組織免疫熒光方法檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞移植前后轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達(dá)；固相氧化劑(Iodogen)法放射性碘標(biāo)記鐵飽和人轉(zhuǎn)鐵蛋白作為示蹤劑；放射性受體分析定量hMSCs轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的數(shù)量及與碘化轉(zhuǎn)鐵蛋白的親和力；干細(xì)胞移植手術(shù)后第2、10天，蛛網(wǎng)膜下腔注射放射示蹤劑后不同時(shí)間，SPECT針孔準(zhǔn)直器平面采集系列圖像，采用放射性碘標(biāo)記人血清白蛋白作為對(duì)照顯像劑或無(wú)細(xì)胞等體積PBS作為對(duì)照移植物；放射自顯影驗(yàn)證顯像結(jié)果。結(jié)果體外培養(yǎng)和移植于脊髓第2天的間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體，數(shù)量約為1.1×10~5／細(xì)胞，該受體對(duì)放射性碘標(biāo)記鐵飽和轉(zhuǎn)鐵蛋白具有高親和力(Kd=0.982 nM)，移植后第10天細(xì)胞在組織內(nèi)幾乎不表達(dá)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體；移植后第2天，活體閃爍掃描成像顯示：示蹤劑注入蛛網(wǎng)膜下腔16h～24h， 解放軍總醫(yī)院博士學(xué)位論文 中文摘要 脊髓的間充質(zhì)干細(xì)胞移植部位出現(xiàn)可分辨放射性聚集，，以放射性碘標(biāo)記的人 血清白蛋白作為示蹤劑或PBS作為移植物的兩個(gè)對(duì)照組僅見(jiàn)本底影像;感興 趣區(qū)半定量分析顯示實(shí)驗(yàn)組與兩個(gè)對(duì)照組之間顯像結(jié)果差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P0.05);放射自顯影進(jìn)一步印證了活體顯像結(jié)果的特異性;移植后第10 天，三組動(dòng)物脊髓內(nèi)移植部位均未見(jiàn)陽(yáng)性顯像。 標(biāo)志物二:多巴胺DZ受體 方法來(lái)源于自然流產(chǎn)人胚胎的側(cè)腦室下區(qū)的經(jīng)端粒酶基因轉(zhuǎn)染的神經(jīng)前體 細(xì)胞系hNPC一TERT，移植于兔脊髓;經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增(RT一PCR)、細(xì)胞和組織 免疫熒光方法檢測(cè)多巴胺D:受體在移植前后的表達(dá);柱層析法合成 ，‘c一Racl叩ride作為示蹤劑;HeLa細(xì)胞作為移植對(duì)照，細(xì)胞移植術(shù)第2天， 移植動(dòng)物活體PET顯像;移植細(xì)胞并注射”c~Raclopride后，取兔離體脊髓 PET顯像驗(yàn)證活體顯像結(jié)果。 結(jié)果體外培養(yǎng)和移植于脊髓第2天的神經(jīng)前體細(xì)胞系hNPC一TERT表達(dá)多巴 胺DZ受體，數(shù)量約為8 x 10勺細(xì)胞，該受體對(duì)放射性標(biāo)記D:受體拮抗劑一 Raelopride具有高親和力(Kd=1 .515硯);靜脈注射”e.Raclopdde后PET 顯像顯示，兔活體和離體脊髓內(nèi)神經(jīng)前體細(xì)胞移植部位有肉眼可分辨的放射 性濃聚灶，而HeLa細(xì)胞作為移植物的對(duì)照組僅見(jiàn)本底影像;感興趣區(qū)半定 量分析顯示兩組顯像結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 結(jié)論核素顯像活體示蹤干細(xì)胞的具有可行性;應(yīng)用轉(zhuǎn)鐵蛋白受體或多巴胺 玩受體顯像可以分別特異性地追蹤到移植在動(dòng)物脊髓內(nèi)3x1o“的干細(xì)胞 (hMSCs)或神經(jīng)前體細(xì)胞(hNPC一TERT)，從而了解細(xì)胞移植術(shù)的成功與 否、移植細(xì)胞的存活、增殖狀態(tài)以及監(jiān)測(cè)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的可能等等。
【圖文】：

兔脊髓內(nèi)干細(xì)胞懸液注射示意

兔脊髓細(xì)胞移植后，loRaclop“dePET圖像Rol半定量分析，圓形Rol面積ZIPixe，，中心與體外標(biāo)記點(diǎn)距離(標(biāo)尺)=2·35cmo
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R817

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2710427