本文關鍵詞：常山酮抑制放療導致Lewis肺癌細胞小鼠移植瘤上皮間質轉化的機制研究

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【摘要】：目的:探討應用常山酮阻斷轉化生長因子-β(TGF-β)信號傳導通路,并觀察其與腫瘤的上皮間質轉化(EMT)的相關性。方法:建立腫瘤移植瘤動物模型,挑選80只腫瘤負荷相近的小鼠隨機分為五組,分別為空白對照組(NC)、常山酮組、放射治療組(RT)、常山酮聯(lián)合放射治療組,以及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組,每組16只。當移植瘤最大徑長至0.8cm時,作為實驗的第1天。對照組不做處理;常山酮組予常山酮灌胃給藥,每只鼠30μg/0.2ml/d,連續(xù)一個月或至處死;放射治療組于第3天、4天給予移植瘤6MV-X線照射,放射治療劑量為10Gy×2;放射治療聯(lián)合常山酮組給藥處理同常山酮組,放射治療的時間及劑量同放射治療組;放射治療聯(lián)合抑制劑組于第1天開始予TGF-β抑制劑(SB431542終濃度1μM)灌胃給藥,每只小鼠0.1ml/d,連續(xù)一個月或至處死,放射治療處理同放射治療組。分別應用ELISA、Western Blot、免疫組化及免疫熒光等技術,研究各組Lewis肺癌(LLC)細胞系TGF-β信號傳導通路的變化及其對EMT生物指標的影響。結果:ELISA實驗結果顯示,放射治療后小鼠移植瘤LLC細胞中TGF-β水平較放射治療前升高,且放療后10天、14天時TGF-β所出現(xiàn)的變化和進行治療之前對比而言,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫組織化學結果顯示:單純放射治療組腫瘤組織中可見大量黃色染色區(qū)域,TGF-β呈陽性表達。單純放射治療組TGF-β水平較空白對照組明顯升高(P0.05),而放射治療聯(lián)合常山酮組TGF-β水平明顯低于單純放射治療組(P0.05),放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組TGF-β水平無統(tǒng)學差異(P0.05)。通過實驗研究確立了照射及常山酮對TGF-β信號通路的影響。實驗中發(fā)現(xiàn),在單純放射治療組中,小鼠的移植瘤中出現(xiàn)的P-Smad2蛋白表達水平和空白對照組進行比較來看,有很明顯的上升,而Smad6、7的蛋白表達情況則出現(xiàn)下降;此外,兩聯(lián)合組小鼠移植瘤內(nèi)的P-Smad2蛋白表達較單純照射組明顯降低,Smad6、7蛋白表達較空白對照組明顯升高。移植瘤Western Blot顯示:RT組E-cadherin表達降低、N-cadherin、Vimentin表達升高;兩聯(lián)合組較RT組E-cadherin表達升高,N-cadherin、Vimentin表達降低。小鼠移植瘤免疫組織化學結果顯示:單純照射組較空白對照組E-cadherin表達降低、N-cadherin表達升高;兩聯(lián)合組較單純照射組E-cadherin表達均升高,N-cadherin表達均呈陰性。放射治療結束后第12天(實驗第15天),兩聯(lián)合組腫瘤體積開始小于放射治療組(P值均小于0.05)。結論:放射治療極有可能是啟動了TGF-β信號通路,從而導致上皮間質化被誘導出現(xiàn);常山酮所能起到的作用是能夠抑制放療所導致的腫瘤細胞移植瘤EMT,也就是說,其作用機制可能與TGF-β信號通路的激活或阻斷存在聯(lián)系。
【關鍵詞】：轉化生長因子-β SB431542 放射治療 常山酮 上皮間質轉化
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2;R730.55
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 對象與方法13-25
• 1.1 材料和儀器13-15
• 1.1.1 細胞系和動物13
• 1.1.2 試劑13-14
• 1.1.3 耗材14
• 1.1.4 照射裝備和參數(shù)14
• 1.1.5 儀器設備14-15
• 1.2 實驗方法15-25
• 1.2.1 試劑的配制15-16
• 1.2.2 細胞培養(yǎng)16-17
• 1.2.3 動物的飼養(yǎng)管理17
• 1.2.4 移植瘤模型的建立17
• 1.2.5 小鼠分組及治療方法17-18
• 1.2.6 小鼠腫瘤組織中蛋白含量的測定18
• 1.2.7 Western Blot法測定smad蛋白水平18-19
• 1.2.8 免疫印跡19-22
• 1.2.9 Elisa法檢測小鼠腫瘤組織TGF-β 水平22-23
• 1.2.10 非生物素免疫組化二步法檢測腫瘤組織EMT相關蛋白及TGF-β表達情況23-24
• 1.2.11 統(tǒng)計學方法24-25
• 結果25-31
• 2.1 TGF-β 水平的測定25-26
• 2.1.1 免疫組織化學結果25
• 2.1.2 不同時間段TGF-β 的表達情況25-26
• 2.1.3 各組TGF-β 水平的變化26
• 2.2 EMT相關標志物變化26-29
• 2.2.1 細胞免疫熒光顯示EMT相關標志物變化26-27
• 2.2.2 小鼠移植瘤免疫組化顯示27-28
• 2.2.3 移植瘤Western Blot顯示28-29
• 2.3 TGF-β/smad通路變化29-30
• 2.4 TGF-β 抑制劑對小鼠腫瘤細胞的抑制作用30-31
• 討論31-40
• 3.1 上皮間質轉化與腫瘤的增殖和轉移31-33
• 3.2 EMT與腫瘤放化療抵抗的關系33-35
• 3.3 放射治療可以導致上皮間質轉化35-36
• 3.4 TGF-β信號通路與EMT36-37
• 3.5 放射治療會導致TGF-β 的升高37-38
• 3.6 常山酮阻斷TGF-β 通路38-40
• 結論40-41
• 論文創(chuàng)新點41-42
• 參考文獻42-54
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明54-55
• 綜述 上皮間質轉化網(wǎng)絡是腫瘤治療抵抗的新靶點55-89
• 綜述參考文獻68-89
• 致謝89-90
• 個人簡歷90

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本文編號：1085864