本文關鍵詞：過表達ICAM-1間充質(zhì)干細胞對實驗性自身免疫性甲狀腺炎作用的機制研究

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【摘要】：目的:1.建立實驗性自身免疫性甲狀腺炎(Experimental autoimmune thyroiditis,EAT)模型,給予不同MSC治療,通過檢測各種指標,觀察各組MSC對EAT的療效。2.用氯甲基苯甲酰氨(CM-Dil)染色各組MSC,觀察輸注的MSC在體內(nèi)的分布。3.提取各組脾細胞蛋白,western blot檢測各組ERK及P38通路改變,探討MSC發(fā)揮作用的機制。方法:1.訂購6周齡雌性C57BL/6小鼠60只,于動物中心喂養(yǎng)1周后,建立自身免疫性甲狀腺炎(EAT)模型。共分為6組,每組10只,除正常組外,其他各組均于第0天和第14天用豬甲狀腺免疫球蛋白(Porcine Thyroglobulin,PTg)分別與完全弗氏佐劑(Freund’s adjuvant complete,CFA)及非完全弗式佐劑(Freund’s adjuvant incomplete,IFA)等體積充分混勻乳化后,皮下多點免疫小鼠,建立EAT模型;治療組于第0天和第14天給予3×105MSC/只相應細胞治療,正常組及模型組尾靜脈注射等量生理鹽水作為對照,第28天稱取各組小鼠體重,摘眼球取血,測血清TT3、TT4、TSH、TGAb、TPOAb、TMAb水平,并分離甲狀腺組織,行HE染色,觀察各組甲狀腺破壞嚴重程度,取各組小鼠脾臟,并稱重,計算脾臟指數(shù)(脾臟重量mg/體重g),碾碎脾臟,裂解紅細胞、洗滌,得到單個核細胞,加入TRIzol試劑,提取RNA,逆轉(zhuǎn)錄成為c DNA后進行q-PCR檢測炎性因子IL-4、IL-10、IL-17、INF-γ的表達水平;另外,取模型小鼠的脾細胞,體外與各組MSC共培養(yǎng),檢測上述炎性因子的表達水平。2.訂購6周齡雌性C57BL/6小鼠60只,運用豬甲狀腺球蛋白及弗式佐劑建立模型后,于第0天及第14天給予相應治療,治療前用CM-Dil染色各組MSC細胞,尾靜脈注射3×105個MSC/只相應細胞,第28天收集標本,麻醉小鼠,心臟灌流,取甲狀腺及肺臟組織,制作冰凍切片,熒光顯微鏡下觀察各組MSC在甲狀腺及肺臟的分布。3.取上述的各組小鼠脾臟單個核細胞5×106,加入細胞裂解液80ul,提取胞漿蛋白,BCA法測蛋白濃度,western blot檢測各組MAPK信號通路中的P38及ERK通路有無改變。結果:1.血清甲狀腺相關激素及抗體檢測結果顯示,模型組TPOAb、TGAb、TMAb、TSH均較正常組高,治療組較模型組均有所下降,但C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組較C3H10T1/2-MIGR1/MSC組下降明顯,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),模型組TT4的水平較正常組低,治療組均較模型組有所上升,C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組較C3H10T1/2-MIGR1/MSC組上升明顯,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。甲狀腺HE染色結果顯示模型組甲狀腺濾泡破壞,大小不均,上皮細胞增生,炎性細胞浸潤,C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組及原代MSC組甲狀腺破壞明顯減輕,上皮增生減少,炎性浸潤減少,其他治療組炎性浸潤的改善不明顯。模型組脾臟指數(shù)明顯高于正常組(P0.01),C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組較C3H10T1/2-MIGR1/MSC組脾臟指數(shù)下降,(P0.01),而其他治療組脾臟指數(shù)改善不明顯。體內(nèi)、體外實驗q-PCR檢測炎癥因子,模型組IL-10及IL-4水平均較正常組低,IL-17及INF-γ均較正常高,C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組較C3H10T1/2-MIGR1/MSC組IL-10及IL-4的水平明顯增加,IL-17及INF-γ的分泌明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.MSC歸巢研究顯示C3H10T1/2-ICAM-1/MSC歸巢到甲狀腺最明顯,而原代MSC在肺部滯留最多。3.western blot顯示模型組ERK及P38較正常組磷酸化增強,而C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組ERK及P38去磷酸化最明顯。結論:1.給予C3H10T1/2-ICAM-1/MSC治療組,無論從病理、血清抗體指標、炎性因子的改善、脾臟指數(shù)下降情況均說明C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組療效最佳。2.MSC歸巢實驗結果顯示,C3H10T1/2-ICAM-1/MSC治療組歸巢到甲狀腺最多。故ICAM-1促進MSC的體內(nèi)遷移能力。3.C3H10T1/2-ICAM-1/MSC通過使小鼠免疫細胞內(nèi)P38、ERK的去磷酸化,調(diào)節(jié)免疫細胞內(nèi)的相關基因的表達,從而影響免疫細胞的分化、增殖、遷移等。
【關鍵詞】：細胞間粘附分子-1 間充質(zhì)干細胞 實驗性自身免疫性甲狀腺炎 歸巢MAPK 信號通路 western blot
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R725.8
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、建立EAT小鼠模型，給予各組MSC治療，并觀察療效16-36
• 1.1 對象和方法16-24
• 1.1.1 主要試劑和儀器16-17
• 1.1.2 實驗動物17
• 1.1.3 實驗所用細胞17
• 1.1.4 相關引物序列17-18
• 1.1.5 方法18-23
• 1.1.6 統(tǒng)計分析23-24
• 1.2 結果24-33
• 1.2.1 血清中TT3、TT4、TSH、TPOAb、TMAb、TGAb水平24-29
• 1.2.2 甲狀腺組織病理比較29-30
• 1.2.3 q-PCR檢測炎性因子水平30-31
• 1.2.4 脾臟指數(shù)31-32
• 1.2.5 體外共培養(yǎng)，，q-PCR檢測炎性因子32-33
• 1.3 討論33-35
• 1.4 小結35-36
• 二、ICAM-1 分子促進MSC歸巢36-41
• 2.1 對象和方法36-37
• 2.1.1 主要試劑及儀器36
• 2.1.2 實驗動物36
• 2.1.3 實驗所用細胞36-37
• 2.1.4 方法37
• 2.2 結果37-39
• 2.3 討論39-40
• 2.4 小結40-41
• 三、ICAM-1 通過抑制MAPK通路發(fā)揮治療作用41-47
• 3.1 對象和方法41-44
• 3.1.1 實驗主要試劑及儀器41-42
• 3.1.2 主要試劑的配制42
• 3.1.3 方法42-44
• 3.1.4 統(tǒng)計學處理44
• 3.2 結果44-45
• 3.3 討論45-46
• 3.4 小結46-47
• 結論47-48
• 參考文獻48-51
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明51-52
• 綜述 MSC與多種疾病的關系及其臨床應用前景52-60
• 綜述參考文獻55-60
• 致謝60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉強,彭莉,杜藝,李宓,賈寧,鄒和群;新型人工肝單純白蛋白透析治療肝衰竭的臨床研究[J];中國危重病急救醫(yī)學;2005年10期

2 蘇芳;肖衛(wèi)國;楊娉婷;;自身免疫性甲狀腺病伴SLE 2例分析[J];中國誤診學雜志;2010年16期

本文編號：609996