本文關鍵詞：應用iTRAQ技術篩選兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇差異性表達蛋白質(zhì)

  更多相關文章： 蛋白組學 iTRAQ 癲癇 皮質(zhì)發(fā)育障礙

【摘要】：目的：本文旨在篩選兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇中差異性表達的蛋白,從而以尋找其生物學標志物以及治療的潛在靶點。方法：以兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇腦組織(皮質(zhì)發(fā)育障礙組)以及創(chuàng)傷后因顱內(nèi)高壓術后的兒童正常腦組織(對照組)為對象。采用同位素相對標記與絕對定量技術(isobaric tag for relative and absolute quantification, iTRAQ)結合雙向液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜(2D liquid chromatograph electrospray tandem mass spectrometry,2D-LC-MS/MS)來鑒定兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇差異性表達蛋白,對所獲得差異性蛋白質(zhì)進行生物信息學分析,從而篩選出具有潛在研究價值的候選蛋白。最后應用實時定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡,免疫組化方法驗證這些候選蛋白在兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇中的表達情況。結果：通過iTRAQ及2D-LC-MS/MS方法,一共鑒定出153種蛋白質(zhì)在兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇腦組織及兒童正常腦組織中有表達差異(其中在兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇腦組織中64種蛋白質(zhì)上調(diào),89種蛋白質(zhì)下調(diào)；P0.05)。通過GO (Gene ontology)功能分析提示153種差異性蛋白主要參與酶催化活性的調(diào)節(jié),蛋白質(zhì)功能相互作用網(wǎng)狀圖發(fā)現(xiàn)transferri(TF)-. apolipoprotein A1(APOA1)alpha-2-macroglobulin(A2M).ATPase(ATP6V 1 A).vimentin(VIM)處于網(wǎng)狀圖的交叉點。通過實時定量PCR實驗,免疫印跡實驗以及免疫組化實驗來驗證TF, APOA1,A2M,ATP6V1A以及VIM的表達水平,結果提示這5種候選蛋白在兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇腦組織中的表達趨勢與質(zhì)譜結果趨勢一致。結論：采用iTRA Q結合2D-LC-MS/MS技術,能夠有效地篩選出兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇中差異表達的蛋白,從而在診斷及治療方面為該病提供了潛在的生物學靶點及方向。
【關鍵詞】：蛋白組學 iTRAQ 癲癇 皮質(zhì)發(fā)育障礙
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742.1
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 1 材料與方法12-17
• 1.1 腦組織樣本收集12-13
• 1.2 iTRAO定量蛋白質(zhì)組學13-15
• 1.3 質(zhì)譜及生物信息學的分析15
• 1.4 驗證候選蛋白的表達水平15-17
• 1.5 統(tǒng)計學部分17
• 2 結果17-28
• 2.1 iTRAQ核素標記分組及質(zhì)譜結果17-24
• 2.2 生物信息學分析結果24-26
• 2.3 mRNA水平的表達驗證26
• 2.4 Western blot驗證差異蛋白表達水平26-27
• 2.5 免疫組化驗證候選蛋白的表達水平27-28
• 3 討論28-32
• 全文小結32-33
• 參考文獻33-36
• 文獻綜述：iTRAQ技術及其在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的運用36-44
• 參考文獻41-44
• 致謝44-45
• 攻讀學位期間的研究成果及發(fā)表的學術論文目錄45

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本文編號：596605