目的觀察中性粒細(xì)胞在川崎病(KD)急性期的功能及S100A8/A9蛋白表達(dá)的變化,并探討其意義。方法依據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)選取2006年11月至2007年7月在復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院住院的KD患兒為研究對(duì)象,選取同期手術(shù)患兒為本研究對(duì)照組。通過二氫若丹明熒光染色法分析KD患兒中性粒細(xì)胞功能,并用熒光定量PCR法檢測(cè)KD患兒中性粒細(xì)胞S100A8/A9 mRNA表達(dá)。結(jié)果共納入KD患兒32例,其中男19例,女13例,年齡2個(gè)月至7歲2個(gè)月,平均(2.1±1.9)歲。冠狀動(dòng)脈損害者6例,無冠狀動(dòng)脈損害者26例;對(duì)照組手術(shù)患兒20例。KD急性期中性粒細(xì)胞明顯活化,使用IVIG治療后中性粒細(xì)胞活化百分比下降。KD急性期中性粒細(xì)胞S100A8/A9 mRNA的表達(dá)增加;IVIG治療后,無冠狀動(dòng)脈損害患兒,S100A8/A9 mRNA表達(dá)明顯降低,冠狀動(dòng)脈損害患兒S100A8/A9mRNA表達(dá)升高。結(jié)論KD急性期中性粒細(xì)胞活化,并存在相關(guān)的活化蛋白高表達(dá),提示中性粒細(xì)胞可能參與了KD的發(fā)病機(jī)制。且在冠狀動(dòng)脈損害患兒中性粒細(xì)胞S100A8/A9 mRNA持續(xù)高表達(dá),提示中性粒細(xì)胞可能參與冠狀動(dòng)脈損害。

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圖1RNA凝膠電泳條帶

圖1RNA凝膠電泳條帶入l林l隨機(jī)引物(l林g)，于70應(yīng)體系:一MLV逆轉(zhuǎn)錄緩沖液2.10mMDNTP10.1MDTTI，M一Ml萬1RNasin0置于PeR擴(kuò)增儀中25oClom80川滅菌注射用水混勻并分裝，用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)(primerpre一actin、51ooAS和51....

圖1.FCM上對(duì)中性粒細(xì)胞進(jìn)行設(shè)門，門內(nèi)為中性粒細(xì)胞

學(xué)附屬兒科醫(yī)院碩士學(xué)位論文中性粒細(xì)胞DHR分析由于中性粒細(xì)胞DHR分析需要2小時(shí)內(nèi)新鮮血液，而部間內(nèi)采集故未能檢測(cè)。本研究對(duì)11例川崎病患者，16例活性檢測(cè)，其中6例川崎病患者為自身前后對(duì)照。流式細(xì)胞儀檢測(cè)中性粒細(xì)胞功能:在流式細(xì)胞儀上對(duì)中性粒細(xì)胞設(shè)門，用前向角和側(cè)向角調(diào)清晰地顯....

圖4標(biāo)準(zhǔn)品的擴(kuò)增曲線

中性粒細(xì)胞中5100A8、S10OAgmRNA表達(dá)比較分析。計(jì)算機(jī)根據(jù)擴(kuò)增的情況自動(dòng)繪制的曲線標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的擴(kuò)增曲線、溶解曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線分別見圖4、圖5、圖6、圖7。(uJ﹄ou︶a。u。。se﹄lon﹂012345678910111213141516171819....

圖6樣本和標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增曲線

中性粒細(xì)胞中5100A8、S10OAgmRNA表達(dá)比較分析。計(jì)算機(jī)根據(jù)擴(kuò)增的情況自動(dòng)繪制的曲線標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的擴(kuò)增曲線、溶解曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線分別見圖4、圖5、圖6、圖7。(uJ﹄ou︶a。u。。se﹄lon﹂012345678910111213141516171819....

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