第一部分Six1過表達對人支氣管上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化及纖維化的影響的研究目的:通過上調(diào)Six1在人支氣管上皮細胞(16HBE)的表達,研究其過表達對16HBE細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化和纖維化的影響方法:將含有Six1(NM₀05982)-GV146質(zhì)粒的甘油菌擴大培養(yǎng),去內(nèi)毒素后抽提質(zhì)粒并測定濃度。體外培養(yǎng)16HBE細胞株并設(shè)立實驗組、陰性對照組和空白對照組,實驗組轉(zhuǎn)染Six1(NM₀05982)-GV146質(zhì)粒,陰性對照組轉(zhuǎn)染GV146對照空載質(zhì)粒,空白對照組僅予轉(zhuǎn)染試劑。轉(zhuǎn)染48h后,采用倒置顯微鏡觀察各組細胞形態(tài)的變化;采用RT-PCR檢測Six1、E鈣蛋白、α肌動蛋白、波形蛋白、角蛋白的m RNA的表達;采用Western印跡技術(shù)測定Six1蛋白、E鈣蛋白、α肌動蛋白、波形蛋白、角蛋白的表達;采用RT-PCR及Western印跡技術(shù)檢測各組纖維黏連蛋白m RNA及蛋白的表達變化。結(jié)果:(1)倒置顯微鏡下顯示:實驗組與陰性對照組和空白組相比,細胞從鋪路石樣向梭形改變,細胞間連接間隙增大;(2)Six1的m RNA及蛋白表達較陰性對照組和空白對照增高,差...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要1
abstract1
摘要2
abstract2
第一部分 Six1過表達對人支氣管上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化及纖維化的影響的研究
    引言
    第1章 實驗材料
        1.1 主要試劑及來源
        1.2 主要器械及來源
        1.3 主要溶液配制
    第2章 實驗方法
        2.1 質(zhì)粒擴增及抽提
        2.2 16HBE細胞的傳代與培養(yǎng)
        2.3 細胞鋪板及轉(zhuǎn)染
        2.4 RT-PCR檢測各組細胞中Six1及EMT和纖維化相關(guān)m RNA表達
        2.5 Western bolt檢測各組細胞中Six1、EMT相關(guān)蛋白及纖維黏連蛋白的表達水平
        2.6 統(tǒng)計學方法
    第3章 實驗結(jié)果
        3.1 各組16HBE細胞中Six1 的表達
        3.2 上調(diào)Six1對16HBE細胞形態(tài)的影響
        3.3 上調(diào)Six1對16HBE細胞表型標志物m RNA及蛋白表達水平的影響
        3.4 上調(diào)Six1對16HBE細胞中纖維黏連蛋白表達的影響
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
    參考文獻
第二部分 Six1通過TGFβ1/Smad信號通路調(diào)節(jié)人支氣管上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化及纖維化的研究
    引言
    第1章 實驗材料
        1.1 主要試劑及來源
        1.2 主要器械及來源
        1.3 主要溶液配制
    第2章 實驗方法
        2.1 質(zhì)粒擴增及抽提
        2.2 16HBE細胞的傳代與培養(yǎng)
        2.3 細胞鋪板及轉(zhuǎn)染
        2.4 TGFβ1信號通路的抑制
        2.5 Western bolt檢測各組細胞中EMT、TGFβ1/Smad信號通路相關(guān)蛋白及纖維黏連蛋白的表達水平
        2.6 統(tǒng)計學方法
    第3章 實驗結(jié)果
        3.1 上調(diào)Six1對16HBE細胞中TGFβ1/Smad信號通路的影響
        3.2 抑制TGFβ1 信號通路對Six1-16HBE細胞形態(tài)的影響
        3.3 TGFβ1 通路抑制劑對Six1-16HBE細胞中TGFβ1、phospho-Smad2 蛋白表達水平的影響。
        3.4 TGFβ1 通路抑制劑對Six1-16HBE細胞中E鈣蛋白和α肌動蛋白表達水平的影響。
        3.5 抑制TGFβ1/Smad信號通路對Six1-16HBE細胞中纖維黏連蛋白表達水平的影響。
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
    參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間研究成果
縮略詞表
致謝



本文編號：3895428