新生兒缺氧缺血性腦損傷(hypoxia-ischemia brain damage,HIND)是指圍產(chǎn)期由于嚴重的窒息缺氧引起的腦缺氧缺血性損傷，是導(dǎo)致新生兒死亡和神經(jīng)功能障礙的主要原因，目前尚無特效治療措施。近年來感染在腦損傷中的單獨或聯(lián)合作用逐漸引起人們的重視，為探討感染與缺氧缺血(HI)聯(lián)合作用對腦損傷的影響，在建立LPS+缺氧缺血動物模型的基礎(chǔ)上，以腦梗塞面積、腦組織含水量、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)作為觀察指標(biāo)，探討LPS對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的增敏作用。 對象：(1) 不同劑量LPS的作用，分為0.3mg／g，0.6mg／kg，0.9mg／kg和生理鹽水對照組，各6只；(2)LPS與不同缺氧缺血時間(10min，20min，30min，40min，50min)對腦損傷的聯(lián)合作用，分為LPS注射組(0.3mg／kg)和生理鹽水對照組，各30只。(3)LPS+HI20min與H155min對腦梗塞面積、腦組織含水量、TNF-a、AIF陽性細胞的影響：分為對照組，HI55 min組，LPS+HI20 min組， 一 各34只。 施：＊）新生大鼠IlBD模型制作：新生大鼠乙醚吸入麻醉，切 開頸部皮膚，分離并結(jié)扎左側(cè)頸總動脈，休息lh后吸入8％氧氣形2％ 氮氣混合氣55仍屯對照組只切開頸部皮膚，分離左側(cè)頸總動脈， 不結(jié)扎亦不缺氧。o）新生大鼠LPS＋W腦損傷模型制作：①不同劑量 LPS的作用：給予 0．3mg／kg，0．6mg／kg，0．gmg／kg和生理鹽水）IH，＂－uxAI－－－－射 后，觀察肛溫和體重的變化，72h作MAP《免疫組化染色。r PS與不 同缺氧缺血時間對腦損傷的鵬作用：LPS組①．3ffig八g店生理鹽水 組均于注射4 小時后結(jié)扎左側(cè)頸總動脈并吸入8％的氧 10mln，20min，30min，40min，50min，72h作 MAP－2免疫組化染色。③ LPS＋HI腦損傷模型制作：新生大鼠缺氧缺血前4小時給腹鵬射LPS 0．3m咐，后經(jīng)乙醚吸入麻醉，切開頸部皮膚，分離并結(jié)扎左側(cè)頸總 動脈并吸入鰍氧氣92％歇鵬氣20膿八3）各指標(biāo)的測定：刪 髓面積測定：動物分別于缺氧后3h、sh、2汕、72h經(jīng)心臟灌注后 取腦，4y的多聚甲醛固定24小時，再經(jīng)脫水、包埋制成蠟塊，連續(xù) 冠狀切片，進行微管相關(guān)蛋白七（MAP上）免疫組化染色，染色結(jié)果 經(jīng)圖象分析系統(tǒng)處理，計算出腦損傷的髓；鄙鹵組織含水量測定： 各組動物均于缺血瀕后44小時處死，快速取腦，除去嗅腦，小腦 和腦干，沿大腦中央縱裂分離左右大腦半球，用電子大平精確稱量， 然后置烤箱中烘干再稱重，用公式［（濕重－干重）十濕重」XI 00％來 表示腦組織含水量；＠ITN’－川免疫組化染色：冠狀切片進行MA 免疫組化染色，染色結(jié)果在400 Wb下進行陽性細胞計數(shù)，每張片于 2 鄭州大學(xué)2002年研究生畢業(yè)論文 ＊PS對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的增敏作m 計數(shù)大腦皮層損傷區(qū)域3個視野；＠）All：免疫組化染色：冠狀切片進 行AIF免疫組化染色，染色結(jié)果在400 N下進行細胞形態(tài)學(xué)觀察。 ④統(tǒng)計學(xué)處理采用單因素方差分析、上檢驗，統(tǒng)計數(shù)據(jù)用SPSS軟件處 理。 e：（1）LPS＋HI o傷模型：hPS 0．3。g／kg il與對照組均無 動物死亡，賄、體重的增加與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0“人 ＠LPS組動物的死亡率隨 HI延長而增加門 0兒 50min 35們， LPS組mZO min腦損傷程度明顯大于對照組（P＜0．05），3Omin日， 仍明顯大于對照組o＜0“人 40min時與對照組相比無明顯差別 （P＞0．05），50min兩組腦損傷鵬相同。（2）各指標(biāo)狽定：廁鹵梗塞面 積：W 55邢＋aLPS＋HI20邪？組的腦梗塞面積明顯增加，與對照 組相比均有顯著性差異①＜0“）；LPS＋M20分鐘組腦梗塞面積與 M 55分鐘相b無明顯差異（P＞0刀5）。②腦組織含水量：HI 55分鐘組 及LPS＋allo分鐘組的腦組織含水量明顯增加，與對照組相比均有顯 著性差異p＜0＊5）LP S＋WZO分鐘組與HI 55邢？十L無明顯差 異（P＞0．05）。③TNF－口卜性細胞計數(shù)：HI 55分鐘組及 LPS＋M＋M20分 鐘組陽性細胞數(shù)明顯增加，與對照組相比均有顯著性差異①刃刀5）； ＊＊S＋HIZO分鐘組卜性細胞數(shù)與W 55卅＋相b無明顯差異①＞0刀5）。 w免疫組化：AIF存在于正常細胞的線粒體中，在M和注射LPS ］8迅速從線粒體中轉(zhuǎn)移到細胞核內(nèi)，且出現(xiàn)在大腦損傷區(qū)域（MAP上 陰性區(qū)域人 結(jié)論：（1兀PS 0．3m帥和單純M 201：1fill均不宮5！起明顯的腦損傷， 3 鄭州大學(xué)2002年研究生畢業(yè)論文 卜陀對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的增敏作用 二者聯(lián)合作用卻可以引起明顯的腦損傷，且LPS＋M 20Inin與W 55恤引起的腦損傷基本相同，提示LPS對 m引起的腦損傷有增敏作用。 Q）LPS對HI腦損傷增敏作用可能是通過TN’F川介導(dǎo)的炎 癥反應(yīng)、AIF介導(dǎo)的細胞凋亡引起的。
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：R722.1
【部分圖文】：

州大學(xué)2002年研究生畢業(yè)論文LPS對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的.LEFTCONHI55minLPS+HI20min圖3LPS對HIBD大鼠腦組織含水量的影響
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本文編號：2874653