先天性心臟病(CHD)一直以來都是嬰兒死亡的一個(gè)主要病因。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為CHD主要與遺傳和環(huán)境有關(guān),其中遺傳因素的作用起著主要作用。雖然目前已發(fā)現(xiàn)多個(gè)與心肌細(xì)胞發(fā)育、先天性心臟病發(fā)生相關(guān)的基因,但其確切機(jī)制并不十分清楚。因此,從分子水平上開展先天性心臟病的病因研究,發(fā)現(xiàn)新的靶基因十分必要。 LYRM1(LYR motif containing 1)是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的基因,一篇有關(guān)其與肥胖關(guān)系的文獻(xiàn)報(bào)道表明其可以促進(jìn)前體脂肪細(xì)胞的增殖和抑制前體脂肪細(xì)胞的凋亡,多組織表達(dá)譜提示該基因中等豐度表達(dá)于人類心臟組織,且與線粒體功能密切相關(guān)。由于在脊椎動(dòng)物的器官發(fā)育中,心臟與脂肪組織均起源中胚層、細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡是心臟形態(tài)建成的兩個(gè)重要進(jìn)程、線粒體是心臟組織重要的能量來源,而目前有關(guān)其與先天性心臟病的關(guān)系尚未見報(bào)道,因此本文擬以該基因?yàn)檠芯繉?duì)象,初步闡明其生物學(xué)特性及其對(duì)心肌細(xì)胞株P(guān)19細(xì)胞功能的影響。 生物信息學(xué)分析提示,LYRM1基因全長(zhǎng)1589 bp(NM_020424),開放閱讀框302～670 bp,編碼122個(gè)氨基酸(NP_065157);定位于染色體16p11.2區(qū)域,有4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子。LYRM1基因編碼的蛋白是一親水性的可溶蛋白,未發(fā)現(xiàn)信號(hào)肽序列,可能為非分泌蛋白;不存在跨膜結(jié)構(gòu)域,應(yīng)不屬于膜蛋白。亞細(xì)胞定位分析提示,LYRM1基因定位于胞核的可能性較大;蛋白結(jié)構(gòu)域分析發(fā)現(xiàn),LYRM1基因編碼蛋白存在一LYR結(jié)構(gòu)域,提示可能參與線粒體功能及能量代謝;蛋白序列比對(duì)提示,LYRM1基因編碼蛋白相對(duì)保守。 P19細(xì)胞是從C3H/He雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的,是一種能夠在體外培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞,二甲基亞砜(DMSO)可將其誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞。 進(jìn)一步構(gòu)建LYRM1基因穩(wěn)定過表達(dá)P19細(xì)胞株,觀察LYRM1基因過表達(dá)(overexpression)對(duì)P19細(xì)胞分化、增殖及凋亡的影響。通過倒置顯微鏡觀察過表達(dá)LYRM1的P19細(xì)胞和含空載體的P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化過程,LYRM1基因?qū)19細(xì)胞分化無明顯影響;MTT比色法測(cè)定及細(xì)胞周期分析結(jié)果顯示,LYRM1基因具有促進(jìn)P19細(xì)胞增殖的作用;磷脂酰絲氨酸外翻分析及Caspase 3活性檢測(cè)結(jié)果提示,LYRM1基因?qū)19細(xì)胞凋亡具有抑制作用。 總之,本研究初步探討了LYRM1基因的生物學(xué)特性及其對(duì)P19細(xì)胞功能的影響,為先天性心臟病的研究提供新的線索。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R725.4
【部分圖文】：

圖 1. LYRM1 基因的核酸及蛋白序列陰影部分表示起始密碼子及終止密碼子；下劃線部分表示加尾信號(hào)AATAAA 序列。運(yùn)用Spidey工具，將LYRM1基因 mRNA序列與人類基因組序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示其含 4 個(gè)外顯子和 3 個(gè)內(nèi)含子（圖 2），所有內(nèi)含子都以 GT 開始，以AG 結(jié)束，遵守 GT-AG 規(guī)律。

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文圖 1. LYRM1 基因的核酸及蛋白序列陰影部分表示起始密碼子及終止密碼子；下劃線部分表示加尾信號(hào)AATAAA 序列。運(yùn)用Spidey工具，將LYRM1基因 mRNA序列與人類基因組序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示其含 4 個(gè)外顯子和 3 個(gè)內(nèi)含子（圖 2），所有內(nèi)含子都以 GT 開始，以AG 結(jié)束，遵守 GT-AG 規(guī)律。

圖 4. LYRM1 基因編碼蛋白的疏水性/親水性分析標(biāo)為序列，縱坐標(biāo)為氨基酸的標(biāo)度值，值越高表示疏水性越強(qiáng)構(gòu)域是膜中蛋白與膜脂相結(jié)合的主要部位，一般由 20 個(gè)組成，形成α-螺旋，它固著于細(xì)胞膜上起錨定作用。跨，對(duì)于了解蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能以及在細(xì)胞中的作用部MHMM 工具對(duì) LYRM1 氨基酸序列的跨膜結(jié)構(gòu)域進(jìn)行預(yù)未找到跨膜結(jié)構(gòu)域。
【參考文獻(xiàn)】

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1 許嬋嬋;韓衛(wèi)青;肖冰;李寧寧;朱鼎良;高平進(jìn);;微小RNA在自發(fā)性高血壓大鼠主動(dòng)脈的差異表達(dá)[J];生理學(xué)報(bào);2008年04期

2 錢玲梅,曹克將,黃元鑄,孔祥清,單其俊;房間隔缺損患者心肌組織基因表達(dá)譜系特征的初步分析[J];中華心血管病雜志;2003年03期

本文編號(hào)：2870707