目的:研究add3基因在BA發(fā)病過(guò)程中的表達(dá)變化,探究add3基因在BA發(fā)生中的作用機(jī)制方法:飼養(yǎng)并繁殖SPF級(jí)別Balb/c小鼠,配對(duì)并記錄雌鼠出現(xiàn)陰栓時(shí)間,實(shí)驗(yàn)組于孕12.5天經(jīng)尾靜脈注射add3-si RNA。小鼠出生12小時(shí)內(nèi),取新生鼠肝臟組織檢測(cè)基因沉默效果。出生后新生小鼠腹腔注射RRV誘導(dǎo)BA發(fā)生,分別取7、14、21天肝臟組織進(jìn)行HE、masson染色,western blot檢測(cè)α-SMA、穿孔素、TNF-α表達(dá)情況與對(duì)照組進(jìn)行比較。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究機(jī)制,提取小鼠膽管上皮細(xì)胞行add3基因沉默后,使用RRV病毒感染細(xì)胞,再與小鼠NK細(xì)胞共培養(yǎng),檢測(cè)NK細(xì)胞活性標(biāo)志物并與對(duì)照組比較。結(jié)果:動(dòng)物實(shí)驗(yàn),對(duì)小鼠進(jìn)行基因沉默后腹腔注射RRV,發(fā)現(xiàn)add3基因沉默的小鼠與野生型小鼠相比,TNF-α、穿孔素表達(dá)水平下降,21天時(shí),小鼠肝臟纖維化程度更重。通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)add3基因沉默后被RRV感染的膽管上皮細(xì)胞與NK細(xì)胞共培養(yǎng),NK細(xì)胞分泌的活性物質(zhì)減少,殺傷能力減弱。結(jié)論:小鼠在體實(shí)驗(yàn),RRV誘導(dǎo)add3基因沉默小鼠肝纖維化程度較非基因沉默小鼠更重。在體和離體實(shí)驗(yàn)中,add3基因沉默后,NK細(xì)胞在RRV感染發(fā)生后,分泌的活性物質(zhì)減少。add3可能參與NK細(xì)胞免疫突觸形成的過(guò)程,通過(guò)與NK細(xì)胞的相互作用,導(dǎo)致BA的發(fā)生。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R725.7
【部分圖文】：

a7天小鼠圖片

b14天小鼠圖片

圖 1-1c 21 天小鼠圖片表 1-1 小鼠 BA 發(fā)生率和 21d 生存率組名 小鼠總數(shù) BA 數(shù)BA 發(fā)生率%21d 生存率%A 20 0 0 100B 8 0 0.00% 87.5%*C 20 14 70%* 35.0%*D 26 23 88.5%*△15.4%*△
【參考文獻(xiàn)】

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1 汪光蓉;張國(guó)元;楊健;唐中;唐恩潔;朱道銀;;小干擾RNA(siRNA)對(duì)小鼠乙型肝炎病毒復(fù)制和表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

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1 彭飛;新生小鼠NK細(xì)胞對(duì)Mφ細(xì)胞調(diào)控不足致膽道閉鎖的機(jī)理研究[D];華中科技大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2850647