發(fā)布時(shí)間：2020-08-25 01:24

【摘要】： 目的分析腸道病毒(EV)在兒童手足口病及下呼吸道感染疾病中的感染狀況及血清型特征,并探討實(shí)時(shí)PCR方法在臨床標(biāo)本中的診斷價(jià)值,為臨床診斷和治療提供參考。 方法1.研究對(duì)象2009年4月至9月,首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院感染科門(mén)診診斷的手足口病患兒。采集患兒咽拭子和皰疹液及血清,用實(shí)時(shí)RT-PCR方法同時(shí)檢測(cè)腸道病毒通用型(EV)、柯薩奇A16型(CA16)、腸道病毒71型(EV71)；用ELISA方法對(duì)留取的雙份血清標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)柯薩奇A16型、腸道病毒71型IgM抗體,結(jié)果與實(shí)時(shí)RT-PCR法結(jié)果進(jìn)行比較分析。選取CA16、EV71陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行VP1區(qū)基因片段擴(kuò)增,電泳鑒定后測(cè)序,與Genbank進(jìn)行blast比對(duì),并利用生物分析軟件進(jìn)行進(jìn)化分析。 2.研究對(duì)象2008年6月至2009年9月,首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院呼吸病房收治的下呼吸道感染患兒。采集患兒靜脈血分離血清,呼吸道標(biāo)本,ELISA方法檢測(cè)血清EV IgM,實(shí)時(shí)RT-PCR方法檢測(cè)呼吸道標(biāo)本。與其他下呼吸道感染相關(guān)的病原進(jìn)行比較分析。對(duì)RT-PCR陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行VP4區(qū)擴(kuò)增測(cè)序,部分標(biāo)本進(jìn)行5‘非編碼區(qū)的擴(kuò)增測(cè)序,結(jié)果與Genbank進(jìn)行blast比對(duì),確定EV血清型。 結(jié)果1.174例手足口病患兒中EV陽(yáng)性167例, CA16陽(yáng)性率67.1%(112/167),EV71陽(yáng)性率27.5%(46/167)。CA16：EV71為2.43：1。131例患兒采集到雙份靜脈血,第一次血清CA16型IgM抗體陽(yáng)性38.9%(51/131),二次血清陽(yáng)性74.8%(98/131)：第一次血清EV71型IgM抗體陽(yáng)性19.1%(25/131),二次血清陽(yáng)性24.4%(32/131)。第一次血清結(jié)果與實(shí)時(shí)RT-PCR結(jié)果進(jìn)行比對(duì), CA16、EV71一致性檢驗(yàn)Kappa值0.353、0.735；二次血清結(jié)果與實(shí)時(shí)RT-PCR結(jié)果比對(duì), CA16、EV71一致性檢驗(yàn)Kappa值0.830、0.898。實(shí)時(shí)RT-PCR法結(jié)果與二次血清檢測(cè)IgM結(jié)果一致性很好。測(cè)序結(jié)果：CA16陽(yáng)性標(biāo)本病毒株同源性88.7%-98.5%,與13株B基因組參比序列核苷酸同源性88.1%-96.4%。EV71標(biāo)本病毒株核苷酸同源性95.8%-98%,屬C4亞型；與C4亞型參比序列核苷酸同源性96.5%-98.2%；與C4亞型以外的其他基因型及亞型的同源性81.9%-90%。 2.402例下呼吸道感染患兒,血清EV-IgM抗體陽(yáng)性21.1%(85/402),柯薩奇病毒74例,�？刹《�56例,其中45例患兒血清同時(shí)檢測(cè)到上述兩種病毒IgM抗體。2008年6月-2009年9月的15個(gè)月均檢測(cè)到EV-IgM抗體,2008年12月陽(yáng)性率最低,2008年7月陽(yáng)性率最高。學(xué)齡兒童陽(yáng)性率相對(duì)較高。85例EV陽(yáng)性患兒中62例伴MP感染,10例伴常見(jiàn)呼吸道病毒感染。呼吸道標(biāo)本實(shí)時(shí)RT-PCR法檢出EV陽(yáng)性15例,陽(yáng)性率3.7%(15/402)。陽(yáng)性標(biāo)本測(cè)序結(jié)果通過(guò)blast比對(duì),確定EV血清型包括EV68 3例,ECH030 3例,CVB2 2例,EV71、CVA3、CVA9、CVB1和CVB3各1例。與肺炎相關(guān)血清型有EV71、CVA3、CVA9、ECH030、EV68、CVB1；與支氣管炎相關(guān)血清型ECH030、CVB2、CVB3。 結(jié)論1.2009年夏季兒童手足口病病原以CA16和EV71為主。EV71陽(yáng)性率較之前報(bào)道有所上升,以C4亞型為主。對(duì)于手足口病,實(shí)時(shí)RT-PCR法較血清學(xué)檢測(cè)特異性IgM抗體更適于疾病早期診斷。2.下呼吸道感染患兒血清EV-IgM抗體全年均可檢測(cè)到,近年與下呼吸道感染相關(guān)的EV有柯薩奇病毒、EV68、EV71和ECH030等血清型。對(duì)于下呼吸道感染的EV診斷應(yīng)綜合考慮。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R725.1;R725.6
【圖文】：

」匕京協(xié)和醫(yī)學(xué)院同等學(xué)力申清碩_1學(xué)位論文結(jié)果分析16陽(yáng)性樣本VPI區(qū)擴(kuò)增用兩對(duì)CA16VPI區(qū)特異性引物(CA16一IF/CA16一ZR)及(CA16本進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物大小分別約為297bp和881bp(凝膠電泳鑒定后送測(cè)序。10葉P2345678

圖3PCR擴(kuò)增CA16VPI部分基因片段(81一5:881bp片段擴(kuò)增產(chǎn)物16vPI區(qū)核營(yíng)酸序列同源性分析引物均擴(kuò)增出10例標(biāo)本。其中將SSlbp擴(kuò)增片段8.70/0~98.5%。將標(biāo)本與從Genbank中選取的不同年份VPI區(qū)基因序列進(jìn)行同源性對(duì)比，與A基因組的國(guó)徽阜陽(yáng)株(EU812514)的同源性均較低，分別為其他13株參比序列(屬B基因組)的核普酸同源

北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院同等學(xué)力申清碩1學(xué)位論文陽(yáng)性樣本VPI區(qū)擴(kuò)增兩對(duì)EV71VPI區(qū)特異性引物(EV71一3F/EV71一4R)及進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物大小分別約為993bp(全脂糖凝膠電泳檢測(cè)后送測(cè)序。

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王旭艷;馮媛;;急性肺炎患兒腸道病毒感染狀況研究[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2014年09期

2 胡躍華;肖革新;郭瑩;于石成;馬家奇;;2008-2011年中國(guó)大陸手足口病流行特征分析[J];中華疾病控制雜志;2014年08期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王凌燕;長(zhǎng)春市2011-2015年手足口病疫情特征分析及趨勢(shì)預(yù)測(cè)[D];吉林大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2803087