【摘要】： 白血病是造血系統(tǒng)的惡性疾病,是國內(nèi)十大高發(fā)惡性腫瘤之一,其特點為造血組織中某一類型的白血病細胞在骨髓或其他造血組織中惡性增生,并浸潤體內(nèi)各臟器、組織,導致正常造血細胞受抑制,產(chǎn)生各種癥狀。急性白血病中一部分病例因化療耐藥,效果不佳,并發(fā)癥多者預后較差。隨著醫(yī)學的發(fā)展與進步,急性白血病的治療水平也有了很大提高,積極預防治療并發(fā)癥,提高機體抗病能力,可以挽救患者生命。現(xiàn)在,白血病的治療方法有化療、中西醫(yī)結(jié)合治療、骨髓移植、生物調(diào)節(jié),而目前基因治療白血病是研究領域的難點和熱點之一。我國白血病患者約為3-4人/10萬人口,小兒的惡性腫瘤中以白血病的發(fā)病率最高。由于白血病的發(fā)病機制尚未完全明確,困擾著臨床治療,因此闡明白血病的發(fā)病機制,進一步研究基因在兒童白血病發(fā)病機制中的作用,應用基因來達到治療目的是一條新的途徑。 原癌基因BMI-1(B-cell specific moloney leukemia virus insertion site 1, BMI-1)屬于PcG (Polycomb group, PcG)家族中PRCI復合體系,與其他各種PcG蛋白一起通過形成多蛋白復合體參與同源盒基因(homobox, HOX)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),維持HOX的抑制狀態(tài)。HOX在決定細胞定向分化與增殖,調(diào)控機體組織器官發(fā)育方面起決定性作用,BMI-1基因表達異常導致HOX基因表達抑制或激活異常,影響HOX基因正常功能的發(fā)揮。PcG介導的基因沉默是局部事件,不會影響較大范圍的染色質(zhì)區(qū)域,調(diào)節(jié)基因表達的中心環(huán)節(jié)是BMI-1,其他的PcG蛋白影響很小。研究提示PcG蛋白家族中的BMI-1和Ring1B是PRC1復合體的核心亞單位,該復合體在調(diào)節(jié)HOX基因表達、X染色體失活、腫瘤發(fā)生和干細胞自我更新中發(fā)揮重要作用。越來越多的證據(jù)表明,HOX基因在白血病的形成中起到了重要的作用。HOX家族基因廣泛的分為兩大類：HOX基因和non—HOX基因。HOX家族中HOXA9、HOXA10、HOXB3、HOXB4、HOXB6在許多急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia, AML)患者中�？蓹z測到高水平的表達。HOXA9在AML中表達較為普遍,除FAB分型為M3型的AML外均高度表達,在慢性粒細胞白血病(chronic myeloegenous leukemia, CML)和骨髓增生異常綜合征-原始細胞增多型(myelodysplastic syndrome, MDS-RAEB)中也有表達。在24個白血病細胞系中,8個髓系白血病細胞株除HL60、TMM外均可檢測到HOXA9的表達,HOXA9在鼠骨髓細胞中無限制的表達3-10個月后,將不可避免的導致白血病的發(fā)生,提示AML發(fā)生前已有遺傳學的改變。 BMI-1基因可維持干細胞池,是成體干細胞及白血病干細胞自我更新所必需的基因之一,作為致癌基因,BMI-1與造血系統(tǒng)惡性腫瘤及實體瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關。BMI-1基因有望成為一種用于惡性腫瘤的診斷、病情評估、患者預后和判斷惡性腫瘤進展的新指標之一。BMI-1是HOX基因高度特異的靜止子,將基因?qū)肓馨图毎籽』蛄馨土黾毎?可下調(diào)淋巴祖細胞中HOX靶基因。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)BMI-1和／或HOX在多種腫瘤高表達,提示BMI-1/HOX 在研究腫瘤發(fā)病機制和治療等方面可能具有較高的潛在價值。BMI-1作為一個在多種腫瘤中異常表達的癌基因,隨著基因治療研究的進展,在未來基因治療人類腫瘤上的應用前景將是十分廣闊的。人們設想使BMI-1基因和／或HOX基因增加和／或缺失,作為靶點來治療由上游或者下游基因變化引發(fā)的白血病。但目前關于BMI-1在腫瘤細胞中過表達或下調(diào)后對HOX基因表達變化的影響的研究還很少。 由此設計該實驗,觀察BMI-1mRNA、HOXA9mRNA在兒童急性白血病外周血及健康兒童外周血中的表達狀況和兩者間的相關性及其相互影響,進一步探討白血病的發(fā)病機理,為以后白血病的基因治療提供理論依據(jù)。 目的 1.觀察BMI-1及HOXA9基因在兒童急性白血病(acute leukemia, AL)外周血中的表達情況及在AL發(fā)生中的臨床意義。 2.探討AL中BMI-1與HOXA9基因兩者間的相關性。 3.探討白血病的發(fā)病機理,為以后白血病的基因治療提供依據(jù)。 材料與方法 標本取自2008年6月至2009年6月鄭州大學第三附屬醫(yī)院和鄭州市其他醫(yī)院診治的急性白血病兒童及健康兒童的外周血。初治患者經(jīng)聯(lián)合化療第19天復查骨髓象判斷是否完全緩解(CR)。其診斷、CR及復發(fā)的判斷標準均符合2006年中華醫(yī)學會修訂的急性白血病診斷標準。急性白血病兒童標本57例,男女比例為35：22(1.59：1),年齡3個月～14歲,中位年齡5歲。其中急性淋巴細胞性白血病(ALL)38例(B型27例；T型11例),急性髓性白血病(AML)19例(M13例、M25例；M36例；M42例；M53例),經(jīng)過骨髓細胞形態(tài)學、流式細胞免疫表型、染色體等檢查確診。以年齡3個月-12歲,中位年齡6歲健康兒童30例為對照組,男(18例)：女(12例),比例為：1.50：1。各組年齡、性別比較差異無統(tǒng)計學意義。運用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法檢測其外周血BMI-1和HOXA9基因的表達情況,并追蹤隨訪上述基因陽性及陰性患者的緩解率及生存期。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析,所有原始數(shù)據(jù)均進行正態(tài)分布和方差齊性檢驗。實驗數(shù)據(jù)以x±s表示,多樣本均數(shù)比較用單因素方差分析,相關分析用pearson線性相關分析方法,以α=0.05為檢驗水準。 結(jié)果 1. BMI-1基因、HOXA9基因在急性白血病患兒外周血中的表達水平明顯高于對照組(p0.05)。 2. BMI-1基因在B淋巴細胞性白血病外周血中均有表達,其在粒細胞性白血病外周血中部分表達或弱表達,在B淋巴細胞性白血病表達高于粒細胞性白血病(p0.05)。 3. HOXA9基因在急性髓系白血病(除AML-M3)外周血中表達較為普遍,HOXA9mRNA在急性髓系白血病中的表達水平明顯高于急性淋巴細胞白血病患者,兩者相比有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。 4.聯(lián)合化療未緩解組BMI-1mRNA及HOXA9mRNA表達水平高于緩解組,但兩者相比差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),緩解后均未檢測到BMI-1mRNA及HOXA9mRNA表達；初治組、復發(fā)組與完全緩解組相比,前兩者表達顯著高于后者(p0.05)；初治組、復發(fā)組與對照組相比有顯著差異性(p0.05),完全緩解組與對照組相比無顯著差異性(p0.05)。 5.在研究過程中,追蹤隨訪上述基因陽性及陰性患者的緩解率及生存期,在57例患者中共有23例患者觀察到治療情況,其中緩解19例,未緩解4例,總緩解率為85%(19/23)；對其中白血病患兒HOXA9mRNA表達高低與臨床療效、生存率間進行變量直線相關分析,分析結(jié)果提示臨床治療效果、生存率與HOXA9mRNA表達呈負相關,HOXA9mRNA表達水平越高,臨床治療就越差,生存率也就越低。相關系數(shù)r=-0.857,經(jīng)t檢驗P0.01。 6.急性白血病患兒BMI-1、HOXA9兩者的表達水平進行變量線性相關分析,結(jié)果提示BMI-1與HOXA9mRNA表達呈負相關,BMI-1mRNA表達水平越高,HOXA9mRNA表達水平越低；相反BMI-1mRNA表達水平降低,HOXA9mRNA表達水平升高。相關系數(shù)r=-0.667,經(jīng)t檢驗P0.01。 結(jié)論 1. BMI-1基因具有淋系特異性,HOXA9具有髓系特異性,可作為區(qū)別淋巴細胞性白血病和髓性細胞性白血病的標志性基因之一。 2. BMI-1基因、HOXA9基因亦可作為兒童急性白血病的發(fā)病、復發(fā)及治療和預后判斷的指標之一。 3.原癌基因BMI-1與HOXA9表達水平與腫瘤細胞負荷有關,高水平表達急性白血病兒童治療及預后可能較差。 4. BMI-1與HOXA9在兒童AL中表達水平兩者間有明顯負相關性。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R733.7
【圖文】：

結(jié)果性白血病患者化療前后BMI一lmRNA表達受治療、治療過程中失訪和死亡患者外，在57例患療情況，其中緩解19例，未緩解4例，總緩解率為85解組BMI一lmRNA表達水平(1.35土0.41)高于緩解組BM29)，兩者相比(介0.1258，>0.05)，這尚不能說明其表未檢測到BMI一1mRNA表達。初治組及復發(fā)組與完全組表達量顯著高于完全緩解組(介0.013，<0.05);初治表達量有顯著差異性(介0.009，<0.05)，完全緩解組與0.05)。見電泳結(jié)果圖2及表3。M1234567

圖3HOXAgmRNA在初診不同AL患兒中的電泳圖M:make:DL2000.Lanel普通B一ALL.Lane4:AML--MI.Lanes:AML一MS.Lane6:AML--M3.Lane7:AMLT一ALL.Laneg:早前B一ALL表4HOXAg基因在急性白血病患兒和對照組中的表達分組例數(shù)(n)陽性率(0，0)HOxAgmRNA的水平(onR對照組3000AL5733%0.48士0.24*ALL3812%0.21士0.14#AML1974%0.69士0.43$$與#L匕較作0.005，<0.013.2(2)治療結(jié)果、生存率與HOXAgmRNA表達水平的關系除去未接受治療、治療過程中失訪和死亡患者外，在57例患者中患者觀察到治療情況，其中緩解19例，未緩解4例，總緩解率為85%(l血病患兒HOXAg表達高低與臨床療效、生存率間進行變量直線相關分

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本文編號：2732425